[發明專利]狂犬病疫苗抗原含量檢測方法及試劑或試劑盒

在審

• 申請號: 201911114462.5
• 申請日: 2019-11-14
• 公開（公告）號: CN112798787A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 譚小東;李杰玉;周沛;楊世龍
• 申請（專利權）人: 安徽智飛龍科馬生物制藥有限公司;重慶智飛生物制品股份有限公司;北京智飛綠竹生物制藥有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/535
• 代理公司: 北京知聯天下知識產權代理事務所(普通合伙) 11594
• 代理人: 張陸軍;張迎新

1.一種狂犬病疫苗抗原含量檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括：

制備單克隆抗體包被酶標板，并固相化所述單克隆抗體；

將待測疫苗、標準疫苗分別按照倍比梯度稀釋，將所述單克隆抗體包被酶標板洗板、拍干，將不同梯度稀釋的所述待測疫苗和所述標準疫苗分別加入所述單克隆抗體包被酶標板中，37℃孵育1h；

將含有所述待測疫苗和標準疫苗的酶標板洗板拍干，再加入鼠多克隆抗體作為一抗，將含有所述一抗的酶標板封口后置于37℃孵育1h～2h；

將所述含有一抗的酶標板洗板拍干，再加入適宜稀釋度的辣根酶標記山羊抗小鼠過氧化物作為二抗，得到含有二抗的酶標板，37℃孵育1h～2h；

將所述含有二抗的酶標板的洗板后，加入顯色液，室溫下避光反應設定時間，再加入終止液終止反應；

將所述終止反應的酶標板放入酶標儀中，獲取所述標準疫苗和所述待測疫苗在波長450nm處的OD值，計算所述待測疫苗的濃度。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，制備所述單克隆抗體包被酶標板包括：

取所述單克隆抗體稀釋后，加入酶標板中，2-8℃孵育過夜；

將所述單克隆抗體包被酶標板洗板3次后，加入封閉液封閉所述抗體，

再加入磷酸緩沖鹽溶液將所述單克隆抗體固相化，制得所述單克隆抗體包被酶標板。

3.根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于，所述單克隆抗體為針對狂犬病病毒糖蛋白抗原表位的人源化單克隆抗體。

4.根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于，所述單克隆抗體包被酶標板內單克隆抗體添加量為100μl/孔，所述單克隆抗體濃度為1-20μg/ml。

5.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述封閉液為牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和葡萄糖中的一種，所述封閉液添加量為300μl/孔。

6.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述磷酸緩沖鹽溶液內含有蔗糖和果糖。

7.根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于，所述多克隆抗體采用鼠腦來源狂犬病病毒制備。

8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，計算所述待測疫苗的濃度包括：

獲取所述標準疫苗和所述待測儀表在酶標儀中波長450nm處的OD值；

依據所述標準疫苗波長450nm處的OD值建立濃度—OD值標準曲線；

將所述待測疫苗450nm處的OD值帶入所述標準曲線計算出所述待測疫苗的濃度。

9.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述酶標儀中還設置波長630nm，用于檢測雜質干擾對照值。

10.一種狂犬病疫苗抗原含量檢測試劑或試劑盒，其特征在于，所述試劑或試劑盒包括：人源化單克隆抗體、鼠多克隆抗體、辣根酶標記山羊抗小鼠過氧化物、顯色液、終止液及醫學上可接受的輔助材料。