[發明專利]一種穩定性好的檢測1，5-AG的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201911111204.1
• 申請日: 2019-11-14
• 公開（公告）號: CN110702676A
• 公開（公告）日: 2020-01-17
• 發明（設計）人: 孟琛;靳曉黎;孫小芳
• 申請（專利權）人: 北京華宇億康生物工程技術有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31;G01N21/01
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種穩定性很好的醫學檢測領域的檢測1，5?AG的試劑盒及方法。本發明所述試劑盒通過選擇適宜的方法和穩定劑使試劑R1和試劑R2在高葡萄糖濃度的干擾下，在效期內保持穩定。本發明通過吡喃糖氧化酶法測定人體血清樣本中的1，5?AG含量。試驗結果顯示，本發明所述的1,5?AG測定試劑盒相比其他市場上在售試劑盒抗葡萄糖干擾能力強，能夠消除1?30mM/L的內源性葡萄糖干擾，并且在37℃加速條件下，穩定存放7天，較市場上其他1，5?AG測定試劑盒的加速穩定性好，并且該發明有準確度高，精密度高，線性范圍廣，穩定性好等特點，可廣泛應用于糖尿病的診斷與治療。

技術領域

本發明涉及體外診斷試劑生化試劑技術領域，具體涉及一種穩定性好的1，5-AG測定試劑盒及其檢測方法。

背景技術

治療糖尿病的主要目標是預防其慢性并發癥的發生、延緩其慢性并發癥的進展，降低致殘率和病死率并改善患者的生存質量。研究發現血清I 5-AG能精確地檢測出血糖的輕微變化，而果糖胺和HbA1c則不能。1,5-AG 反映糖尿病人血糖的近一周變化，糖化血紅蛋白水平主要反映過去2-3個月血糖變化，果糖胺則反映過去10-14天血糖變化。雖然測定FPG能發現這種變化，但不如1,5-AG敏感。1,5- AG降低時半衰期較短，反映的是近10日的血糖控制情況，而上升時半衰期則較長(30~50天)。當1,5- AG星低值時，表示近期血糖控制不佳。控制改善時，1,5- AG值又以每日0.2~0.3mg/L依次遞增。故認為1,5- AG測定能更準確的反映糖尿病患者短期的血糖控制狀態，這在快速監測藥物療效和類固醇藥物使血糖惡化的作用方面更具有優越性。1,5- AG還可作為早期預測糖尿病病情好轉與惡化趨勢的敏感指標。由于1,5 - AG的異常值比HbA1c、 FMN的幅度范圍明顯增大，參考值與病理值的上下限重疊現象甚少,故其實驗誤差小，準確度及靈敏度高,易于檢出血糖平均水平的微小變化。且在血糖正常的邊緣范圍內也可明顯降低。這一點在HbA1c和FMN難以完成,因此，血中1,5 - AG可作為血糖控制狀態早期的警報。

1,5-脫水-D-山梨醇是一種具吡喃環結構的六碳單糖，是吡喃葡萄糖C-1位置上缺少一個羥基的還原型。高血糖時1,5-AG與葡萄糖一起從腎小球濾出，尿1,5-AG排出量也隨之增加，使其血液中濃度明顯下降。高血糖持續時間越長，1,5-AG水平就越低。1,5-AG代謝穩定，在糖尿病的診斷與治療中很有價值。

1，5-AG檢測方法有很多種，有利用液相層析系統、氣相色譜質子層析技術以及離子交換柱層析系統等來測定1，5-AG和消除葡萄糖的干擾。這些方法的優點是靈敏度高，測定結果準確，但其操作繁瑣，且均需要昂貴的專用儀器，不適合臨床常規檢測。目前測定1,5-AG主要采用全酶法測定，主要有氧化酶法和脫氫酶法兩種方法。目前應用較多的是吡喃糖氧化酶法，且這兩種方法都會受到血清中葡萄糖的干擾，嚴重影響測定結果，所以需要一系列的酶參與消除葡萄糖干擾。目前消除葡萄糖干擾有GOD法、HK和G6PD結合法以及HK和PK結合法三種。其中GOD法因顏色干擾無法消除葡萄糖，，所以不能使用。后兩種方法目前均有使用。但因HK酶穩定性較差，導致了1,5-AG檢測試劑盒的穩定性不好。且隨著放置時間的延長使得其消除葡萄糖的能力減弱。

發明內容

鑒于此，本發明的目的在于解決1，5-AG穩定性的問題，以及對高濃度葡萄糖的消除反應，以便于運輸并使應用更加廣泛。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：