[發明專利]一種穩定性好的檢測1，5-AG的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201911111204.1
• 申請日: 2019-11-14
• 公開（公告）號: CN110702676A
• 公開（公告）日: 2020-01-17
• 發明（設計）人: 孟琛;靳曉黎;孫小芳
• 申請（專利權）人: 北京華宇億康生物工程技術有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31;G01N21/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種1，5-脫水-D山梨醇的檢測試劑盒，其特征在于該試劑盒包含用于消除葡萄糖反應的試劑R1、主反應試劑R2和校準品；其中試劑R1中包含緩沖溶液、己糖激酶、丙酮酸激酶、ATP、4-氨基安替吡啉、磷酸烯醇式丙酮酸，穩定劑、酶保護劑、酶促進劑、防腐劑；試劑R2包含緩沖液、吡喃糖氧化酶、過氧化物酶、顯色劑、防腐劑、穩定劑。

2.根據權利要求1所述的1，5-AG測定試劑盒，其特征在于，所述試劑R1組分濃度為：緩沖液 0.1-100 mmol/L、己糖激酶 0.1-50 KU/L、丙酮酸激酶 0.1-50 KU/L、ATP 0.1-20mmol/L、4-氨基安替吡啉 0.1-30 mmol/L、磷酸烯醇式丙酮酸0.1-50 mmol/L，穩定劑 0.1-10 g/L、酶保護劑 0. 1-10 g/L、酶促進劑0.1-30 mmol/L、防腐劑 0.1-10g/L；所述試劑R2組分濃度為：緩沖液 0.1-100 mmol/L、吡喃糖氧化酶10-100 KU/L、過氧化物酶1-100 KU/L、顯色劑0.1-50 mmol/L、防腐劑0.1-10g/L、穩定劑0.1-10 g/L。

3.根據權利要求2所述的1，5-AG測定試劑盒，其特征在于，所述試劑R1組分濃度為：緩沖液 50.05 mmol/L、己糖激酶 25.05 KU/L、丙酮酸激酶 25.05KU/L、ATP 10.05 mmol/L、4-氨基安替吡啉 15.05 mmol/L、磷酸烯醇式丙酮酸25.05mmol/L，穩定劑 5.05 g/L、酶保護劑 5.05 g/L、酶促進劑15.05mmol/L、防腐劑 5.05g/L；所述試劑R2組分濃度為：緩沖液50.05 mmol/L、吡喃糖氧化酶55KU/L、過氧化物酶50.5 KU/L、顯色劑25.05 mmol/L、防腐劑5.05g/L、穩定劑5.05g/L。

4.根據權利要求1-3所述的1，5-AG測定試劑盒，其特征在于，試劑R1中，所述的緩沖液為磷酸緩沖液、Tris-HCl，MES緩沖液、HEPES緩沖液、甘氨酸緩沖液中的一種或幾種；試劑R2中，所述的緩沖液為磷酸緩沖液、Tris-HCl，MES緩沖液、HEPES緩沖液、甘氨酸緩沖液中的一種或幾種。

5.根據權利要求4所述的1，5-AG測定試劑盒，其特征在于，所述試劑R1和試劑R2中的緩沖液的PH值為6.0-9.0。

6.根據權利要求1-3所述的1，5-AG測定試劑盒，其特征在于，試劑R1和R2中的穩定劑為Triton X系列，甘油，吐溫系列。

7.根據權利要求1-3所述的1，5-AG測定試劑盒，其特征在于，試劑R1中的酶保護劑為經過修飾以后的磷酸化合物，編號為WD-001。

8.根據權利要求1-3所述的1，5-AG測定試劑盒，其特征在于，試劑R1中的酶促進劑為氯化鎂、硫酸鎂、氯化鉀、硫酸鉀。

9.根據權利要求1-3所述的1，5-AG測定試劑盒，其特征在于，試劑R1和R2中的防腐劑為疊氮鈉、亞硝酸鈉、Proclin系列。

10.根據權利要求1-3所述的1，5-AG測定試劑盒，其特征在于，試劑R2中的顯色劑為對羥基苯甲酸。

11.根據權利要求1-10所述，1，5-AG測定試劑盒的檢測方法包括如下步驟：

（1）依次加入試劑R1，待測樣本，混勻，37℃下溫育4-10分鐘，后加入試劑R2，混勻，37℃溫育4-10分鐘后，546nm波長下測定吸光度；

（2）根據定標的標準曲線計算待測樣品中1，5-AG的濃度。

12.根據權利要求11所述，其特征在于，所述的標準曲線采用1，5-AG校準品定標。

13.根據權利要求12所述，其特征在于，1，5-AG校準品的濃度為0-500μmol/L。