[發明專利]綠盲蝽在不同因子下穩定表達的內參基因及其應用

有效

• 申請號: 201911110000.6
• 申請日: 2019-11-14
• 公開（公告）號: CN112795660B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 羅靜;王奧麗;成艷霞;郭麗彬;徐樂天
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 武漢河山金堂專利事務所(普通合伙) 42212
• 代理人: 丁齊旭

本發明提出了綠盲蝽在不同因子下穩定表達的內參基因組合及其應用。具體組合方案如下：不同發育階段穩定表達的內參基因組合為RPL27和RPL32，不同組織的內參基因組合為RPL27和RPL32，dsRNA處理條件下的內參基因組合為RPL27和EF1γ。還提出了該穩定表達內參基因用于熒光定量分析時所使用的不同引物序列。本發明首次確定了綠盲蝽在三種因子條件下最穩定的內參基因組合，為研究綠盲蝽在不同發育階段、不同組織、以及dsRNA介導的RNA干擾條件下基因表達水平的分析提供了合適內參基因的選擇，為研究綠盲蝽的基因功能以及RNAi介導的轉基因作物的研發及其安全評價建立了夯實的基礎。

技術領域

本發明屬于昆蟲分子生物學中實時熒光定量PCR內參基因表達穩定性的技術領域，更具體地，涉及綠盲蝽在不同因子下穩定表達的內參基因組合及其應用；包括綠盲蝽在不同發育階段、不同組織以及dsRNA介導的RNA干擾條件下穩定表達的內參基因及應用。

背景技術

綠盲蝽(Apolygus lucorum)屬于半翅目，盲蝽科，是我國棉花種植區域的主要害蟲之一，其寄主范圍十分廣泛，主要包括棉花、玉米、大豆、苜蓿、十字花科蔬菜、茶樹、花卉、以及各種果樹等，給我國的農業和林業造成了巨大的經濟損失。目前對其的防治主要以化學防治為主，但是化學藥劑的長期使用容易導致抗藥性的產生以及環境污染等問題。鑒于該害蟲在農業經濟上日益增漲的重要性，過去幾十年來，昆蟲學家們從生態學，生理學和分子生物學等角度對其進行了廣泛的研究。隨著高通量測序技術的發展，大量可能參與發育，免疫，能量代謝，繁殖，化學感受等生理過程的基因信息被報道。研究這些基因的功能，理解綠盲蝽各種生物學或生理學過程中的分子機制，對于開發新的盲蝽防治技術具有重要意義。

研究綠盲蝽體內特定基因的功能，最基本的技術方法之一就是對功能基因進行簡單、快速、準確的表達定量分析。與傳統的半定量RT-PCR，印記雜交等定量分析方法比較，實時熒光定量PCR具有操作簡單、特異性強、靈敏度高、重復性好、成本低等優點，是一種最為廣泛使用的基因表達分析技術。然而，一些實驗因素，例如RNA提取中的批次間差異，cDNA合成和PCR反應的效率等等，這些非生物的變異均會影響實時熒光定量PCR的準確性。為了減少這些因素的影響，需要對數據進行標準化過程以消除非生物變異，其中最常用的策略是使用穩定表達參考基因作為數據標準化的內部參照，通常稱為內參基因。因此，實時熒光定量PCR檢測的準確性很大程度上取決于內參基因的選擇。然而目前大量的研究表明，沒有任何一個內參基因mRNA表達水平在所有的實驗條件下都是恒定的。使用不穩定的內參基因作為數據標準化的內部參照會導致對定量數據的錯誤解釋，最終導致錯誤的生物學結論。因此，選擇一個在處理因素作用下表達相對穩定的基因作內參基因是實時熒光定量PCR成功與否的關鍵所在。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有綠盲蝽分子生物學研究過程中內參基因方案的缺乏，提供綠盲蝽在不同因子下穩定表達的內參基因及其應用；包括綠盲蝽在不同發育階段、不同組織中以及dsRNA介導的RNA干擾條件下穩定表達的內參基因、其篩選方法及應用。

本發明的目的是提供一種綠盲蝽在不同因子下穩定表達的內參基因組。

本發明另一目的是提供一種綠盲蝽在不同因子下穩定表達的內參基因組合的篩選方法

本發明再一目的是提供所述綠盲蝽在不同因子下穩定表達的內參基因組合的應用。

本發明上述目的通過以下技術方案實現