[發(fā)明專利]綠盲蝽在不同因子下穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911110000.6
• 申請(qǐng)日: 2019-11-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112795660B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅靜;王奧麗;成艷霞;郭麗彬;徐樂(lè)天
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖北大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 武漢河山金堂專利事務(wù)所(普通合伙) 42212
• 代理人: 丁齊旭

1.一種綠盲蝽在不同因子下穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因組合，其特征在于，

綠盲蝽蟲(chóng)在不同發(fā)育階段中穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因組合為RPL27和RPL32；

綠盲蝽蟲(chóng)在不同組織中穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因組合為RPL27和RPL32；

綠盲蝽蟲(chóng)在dsRNA處理?xiàng)l件下穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因組合為RPL27和EF1γ；

其中RPL27的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，RPL32的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，EF1γ的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述的RPL27作為穩(wěn)定內(nèi)參基因用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析時(shí)所使用的引物序列為：正：GGGGTCACGTGAGTCATGGT 反：GTCTGTTCGGTGACGAGGGT ；

所述的RPL32作為穩(wěn)定內(nèi)參基因用于熒光定量分析時(shí)所使用的引物序列為：

正：CAAGCTCACGAGGAATTGGCG，反：GAGGACTTTCCTGAAGCCGGT；

所述的EF1γ作為穩(wěn)定內(nèi)參基因用于熒光定量分析時(shí)所使用的引物序列為：

正：GCCGCACTTACCTCGTCAAC，反：CCTTGTTGTTCCGCCTTGGG。

2.一種綠盲蝽在不同因子下穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因組合的篩選方法，其特征在于步驟為：

1）、用生物克隆技術(shù)從綠盲蝽全蟲(chóng)的總RNA中提取EF1γ、RPL32、 RPL27、SDH、TBP、ACT2、GAPDH、βTUB、ACT 9個(gè)候選內(nèi)參基因，并通過(guò)RT-PCR技術(shù)進(jìn)行序列驗(yàn)證；

2）對(duì)9個(gè)內(nèi)參基因在不同因子條件下穩(wěn)定表達(dá)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析篩選；

3）確定綠盲蝽在不同因子下穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因組合為：

綠盲蝽蟲(chóng)在不同發(fā)育階段中穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因組合為RPL27和RPL32；

綠盲蝽蟲(chóng)在不同組織中穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因組合為RPL27和RPL32；

綠盲蝽蟲(chóng)在dsRNA處理?xiàng)l件下穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因組合為RPL27和EF1γ；

其中RPL27為核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，RPL32為核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，EF1γ為核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。