[發明專利]新型非病毒載體TSCM基因療法的構建方法及臨床應用

在審

• 申請號: 201911108309.1
• 申請日: 2019-11-13
• 公開（公告）號: CN112795593A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 路春光
• 申請（專利權）人: 路春光
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;C12N5/0783;A61K39/00;A61P35/00;A61P31/12;A61P31/14;A61P31/20;A61P1/16;A61P31/06;A61P31/18
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本發明涉及免疫細胞靶向治療技術領域，傳統CAR?T細胞擴增程序中，通過CD3/CD28單抗激活的單核細胞經白介素2進一步擴增后，大多數T細胞為高度分化的效應/記憶T細胞，自我更新能力較弱，移植后體內存活時間短，致使治療效果較差，本研究通過TSCM代替T細胞，擴增后TSCM比例高達44.41%，極大的改善移植后體內免疫細胞的存活時間，提高治療效果。PiggyBac和Sleep Bueaty載體容量都遠遠超過病毒，甚至可以達到100kb以上，幾乎可以容下所有我們試圖添加的元件，不存在包裝環節和序列特異性要求，無論是從CAR?TSCM未來研發的需求還是從降低成本開拓市場的可能來看，都是最佳的候選者。

技術領域

本發明涉及免疫細胞靶向治療技術領域，特別涉及一種優化的從新鮮或低溫凍存的人體外周血單個核細胞或臍血單個核細胞中分離純化T細胞，T細胞誘導擴增干細胞樣記憶性T細胞（TSCM），通過轉座子載體系統搭建這一新型CAR-TSCM平臺，在未來細胞免疫治療領域的競爭中搶得先機。

背景技術

當前CAR采用的主要載體系統是應用慢病毒(Lentivirus)，其具有的高效包裝和高效感染特性，使其成為適合對T細胞進行遺傳改造的病毒載體。

隨著需要治療的癌癥種類增加和對治療效果要求的提升，對于CART載體系統也提出了更多的挑戰，多靶標系統（提高靶向性），多細胞因子共表達（去除免疫抑制），誘導表達系統(調控靶向分子表達)，自殺系統（防止過激免疫和控制CART壽命），TCR/MHCI敲除系統(阻止GVDH和免疫排斥)等等相關元件和系統的添加，有效的改進了CART的療效，但對于載體的容量和可包裝性提出了很高的要求。慢病毒載體的容量只能容納CART的基本元件，對于更多的元件是無能為力的；同時也存在費用高、包裝困難、免疫原性強、潛在致癌性強、CART療效持續性不好等等顯著缺陷。傳統CAR-T細胞擴增程序中，通過CD3/CD28單抗激活的單核細胞經白介素2進一步擴增后，大多數T細胞為高度分化的效應/記憶T細胞，自我更新能力較弱，移植后體內存活時間短，致使治療效果較差，本研究通過TSCM代替T細胞，擴增后TSCM比例高達44.41%，極大的改善移植后體內免疫細胞的存活時間，提高治療效果。我們急需開發出一個嶄新的CAR-TSCM載體平臺，容納下所有有助于治療的新型元件，便于下一階段的新產品開發，這個平臺必須具有大容量、無序列特異性要求、弱免疫原性、高效而可控的外源基因表達能力、低成本、操作簡便、持續發揮CAR-TSCM功效而避免其潛在致癌可能，以避免目前基于慢病毒的CAR-TSCM系統的顯著缺點，極大的改進細胞治療效果和擴大治療范圍。縱觀現有的生物技術，只有轉座子系統堪當此任。以在人和哺乳動物中應用得最有效的PiggyBac和Sleep Bueaty系統而言，它們的載體容量都遠遠超過病毒，甚至可以達到100kb以上，幾乎可以容下所有我們試圖添加的元件，而且不存在包裝環節和序列特異性要求，無論是從CAR-TSCM未來研發的需求還是從降低成本開拓市場的可能來看，都是最佳的候選者。

本發明人2019年發明了《臨床用TSCM誘導培養和質量控制鑒定試劑盒及應用》（專利號：2019103666958），建立了TSCM高效誘導試劑盒體系，本發明在于搭建成功基于轉座子系統的CAR-TSCM平臺。專利2019101633911中也公布了一種CAR-TSCM制備方法，其利用的是慢病毒載體構建CAR-TSCM，而且是通過磁珠分選T細胞，成本高，效率低。本發明的創新之處在于，在國內第一次建立基于轉座子原理的非病毒CAR-TSCM系統，這個平臺對所有的相關技術系統都是開放的，并實現高度的兼容性，確保隨著技術進步，我們的CAR-TSCM產品也能同步改進，突破所有的技術屏障，持續保持領先地位。反觀其他載體系統，由于容量和系統特性，往往不能兼容新技術而變成競爭狀態，很容易遭到淘汰，技術陳舊速度太快，給公司研發帶來巨大風險，選擇了正確的平臺，就選擇了未來無窮的改進空間，在殘酷競爭中能夠利于不敗之地，同時這個平臺對于其他嚴重的遺傳疾病、傳染疾病、慢性功能喪失性疾病等都具有不可估量的意義，完全可以搭建一個平臺唱很多戲，針對多種疾病展開研究，特別是基因治療領域前景無限，這種研發模式比較起一病一藥的研發模式，無疑具有不可比擬的優勢。

發明內容