[發明專利]100bp DNA分子量標準物的制備方法、引物組及其應用有效
| 申請號： | 201911107232.6 | 申請日： | 2019-11-13 |
| 公開（公告）號： | CN110714053B | 公開（公告）日： | 2023-03-10 |
| 發明（設計）人： | 傅向陽 | 申請（專利權）人： | 生工生物工程（上海）股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 覃蛟 |
| 地址： | 201600 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 100 bp dna 分子量 標準 制備 方法 引物 及其 應用 | ||
1.一種100bp DNA分子量標準物的制備方法，其特征在于，包括使用第一引物、第二引物和搭橋引物，經PCR擴增得到所述100bp DNA分子量標準物；
所述第一引物為如SEQ ID NO.1所示序列；
所述第二引物為如SEQ ID NO.2所示序列；
所述搭橋引物為SEQ ID NO.3所示序列，所述PCR擴增得到的產物的長度為100bp。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述100bp DNA分子量標準物的序列為SEQ ID NO.4所示序列。
3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，PCR反應中，使用的DNA聚合酶包括高保真DNA聚合酶。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述高保真DNA聚合酶包括Pfu DNA聚合酶和/或KOD DNA聚合酶。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述高保真DNA聚合酶包括Pfu DNA聚合酶。
6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，PCR反應中使用Taqplus酶，所述Taqplus酶包括Taq酶和Pfu DNA聚合酶。
7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述Pfu DNA聚合酶的用量占Taqplus酶總酶活當量的10～30％。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述Pfu DNA聚合酶的用量占Taqplus酶總酶活當量的15～25％。
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述Pfu DNA聚合酶的用量占Taqplus酶總酶活當量的20％。
10.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，PCR反應的退火溫度為55～60℃。
11.根據權利要求10所述的制備方法，其特征在于，PCR反應的退火溫度為57～59℃。
12.根據權利要求11所述的制備方法，其特征在于，PCR反應的退火溫度為58℃。
13.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，第一引物、第二引物和搭橋引物的摩爾比為(3～5)：(3～5)：0.1。
14.引物組，其特征在于，包括：第一引物、第二引物和搭橋引物；所述第一引物為SEQID NO.1所示序列；所述第二引物為SEQ ID NO.2所示序列；所述搭橋引物為SEQ ID NO.3所示序列，所述第一引物、所述第二引物和所述搭橋引物經PCR擴增得到的產物的長度為100bp。
15.試劑或試劑盒，其特征在于，包括權利要求14所述的引物組。
16.根據權利要求15所述的試劑或試劑盒，其特征在于，第一引物、第二引物和搭橋引物的摩爾比為(3～5)：(3～5)：0.1。
17.權利要求1-13任一項所述的制備方法，權利要求14所述的引物組或權利要求15或16所述的試劑盒在制備DNA Marker中的應用。
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