[發(fā)明專利]柴胡及其炮制品中氨基酸的含量測定方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201911098416.0
• 申請日: 2019-11-12
• 公開（公告）號: CN110824085A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發(fā)明（設計）人: 龔千鋒;于歡
• 申請（專利權）人: 江西中醫(yī)藥大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06;G01N30/34
• 代理公司: 合肥律眾知識產(chǎn)權代理有限公司 34147
• 代理人: 王雷

本發(fā)明公開了柴胡及其炮制品中氨基酸的含量測定方法，包括以下步驟：S1、以異硫氰酸苯酯PITC為柱前衍生試劑；S2、用色譜柱流動相梯度洗脫檢測波長254nm；S3、測定柴胡炮制前后氨基酸的含量；其中，步驟S1用色譜柱流動相梯度洗脫檢測波長254nm，包括以下步驟：S101、對照品溶液的制備及衍生化：分別精密稱取各氨基酸對照品適量，用50%甲醇配制成一定濃度的對照品溶液。本發(fā)明通過以異硫氰酸苯酯PITC為柱前衍生試劑，采用色譜柱流動相梯度洗脫檢測波長254nm測定柴胡炮制前后氨基酸的含量，本測定方法具有可操作性強、成本低、易推廣等優(yōu)勢，可作為柴胡及其炮制品中氨基酸的含量測定方法。

技術領域

本發(fā)明涉及鱉血柴胡技術領域，具體來說，涉及柴胡及其炮制品中氨基酸的含量測定方法。

背景技術

柴胡為傘形科植物柴胡或狹葉柴胡的干燥根，味苦，性微寒，具疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽氣之功效；主治感冒發(fā)熱、寒熱往來、胸脅脹痛、月經(jīng)不調(diào)、子宮脫垂、脫肛等。常見柴胡飲片有生柴胡、醋柴胡、鱉血柴胡、酒柴胡、柴胡炭、蜜柴胡等多個品種，而以鱉血柴胡最具特色。鱉血柴胡能填陰滋血，抑制其浮陽之性，增強清肝退熱的功效。可用于熱入血室、骨蒸勞熱，至今仍被臨床使用。

目前，由于鱉血制柴胡是一種有地方習慣炮制的中藥，且需臨方炮制，故臨床文獻報道較少，更缺乏飲片的質量標準規(guī)范。

針對相關技術中的問題，目前尚未提出有效的解決方案。

發(fā)明內(nèi)容

針對相關技術中的問題，本發(fā)明提出柴胡及其炮制品中氨基酸的含量測定方法，以克服現(xiàn)有相關技術所存在的上述技術問題。

本發(fā)明的技術方案是這樣實現(xiàn)的：

柴胡及其炮制品中氨基酸的含量測定方法，包括以下步驟：

S1、以異硫氰酸苯酯PITC為柱前衍生試劑；

S2、用色譜柱流動相梯度洗脫檢測波長254nm；

S3、測定柴胡炮制前后氨基酸的含量；

其中，步驟S1用色譜柱流動相梯度洗脫檢測波長254nm，包括以下步驟：

S101、對照品溶液的制備及衍生化：分別精密稱取各氨基酸對照品適量，用50％甲醇配制成一定濃度的對照品溶液，分別吸取各對照品溶液適量，置于同一量瓶中配成混合對照品溶液。吸取混合對照品溶液2mL，置于10mL離心管內(nèi)，加入0.1mol·L^－1異硫氰酸苯酯-乙腈溶液(12∶988)1mL和1.0mol·L^－1三乙胺-乙腈溶液(139∶861)1mL，渦旋混合1min，暗處放置1h，加入正己烷4mL，渦旋混合1min，靜置10min，下層溶液過0.45μm濾膜，備用；

S102、供試品溶液的制備及衍生化：精密稱取柴胡樣品適量(生品1g，炮制品5g)，準確加入50％甲醇25mL，稱定質量，超聲提取30min，放至室溫，稱定質量，加50％甲醇補足減失的質量，于3500r.min^－1離心15min，取上層液2mL置于10mL離心管內(nèi)，后續(xù)試驗按步驟S101方法操作，備用。

S103、空白溶液的制備及衍生化：取50％甲醇溶液2mL，后續(xù)試驗按步驟S101方法進行衍生化處理，即得。

進一步的，還包括以下步驟：

鱉血柴胡制備：取凈柴胡段100g，加入潔凈的新鮮鱉血50mL及黃酒5mL拌勻，悶潤至鱉血和酒液被吸盡，150℃炒10min，取出晾涼，即得。