[發明專利]柴胡及其炮制品中氨基酸的含量測定方法

在審

• 申請號: 201911098416.0
• 申請日: 2019-11-12
• 公開（公告）號: CN110824085A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 龔千鋒;于歡
• 申請（專利權）人: 江西中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06;G01N30/34
• 代理公司: 合肥律眾知識產權代理有限公司 34147
• 代理人: 王雷

1.柴胡及其炮制品中氨基酸的含量測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、以異硫氰酸苯酯PITC為柱前衍生試劑；

S2、用色譜柱流動相梯度洗脫檢測波長254nm；

S3、測定柴胡炮制前后氨基酸的含量；

其中，步驟S1用色譜柱流動相梯度洗脫檢測波長254nm，包括以下步驟：

S101、對照品溶液的制備及衍生化：分別精密稱取各氨基酸對照品適量，用50%甲醇配制成一定濃度的對照品溶液，分別吸取各對照品溶液適量，置于同一量瓶中配成混合對照品溶液，

吸取混合對照品溶液2mL，置于10mL離心管內，加入0.1mol·L^－1異硫氰酸苯酯-乙腈溶液（12∶988）1mL和1.0mol·L^－1三乙胺-乙腈溶液（139∶861）1mL，渦旋混合1min，暗處放置1h，加入正己烷4mL，渦旋混合1min，靜置10min，下層溶液過0.45μm濾膜，備用；

S102、供試品溶液的制備及衍生化：精密稱取柴胡樣品適量（生品1g，炮制品5g），準確加入50%甲醇25mL，稱定質量，超聲提取30min，放至室溫，稱定質量，加50%甲醇補足減失的質量，于3500r.min^－1離心15min，取上層液2mL置于10mL離心管內，后續試驗按步驟S101方法操作，備用，

S103、空白溶液的制備及衍生化：取50%甲醇溶液2mL，后續試驗按步驟S101方法進行衍生化處理，即得。

2.根據權利要求1所述的柴胡及其炮制品中氨基酸的含量測定方法，其特征在于，還包括以下步驟：

鱉血柴胡制備：取凈柴胡段100g，加入潔凈的新鮮鱉血50mL及黃酒5mL拌勻，悶潤至鱉血和酒液被吸盡，150℃炒10min，取出晾涼，即得。

3.根據權利要求1所述的柴胡及其炮制品中氨基酸的含量測定方法，其特征在于，步驟S2用色譜柱流動相梯度洗脫檢測波長254nm，其中色譜柱流動相梯度洗脫具體如下：色譜柱為4.6mm ×250mm，5μm，流動相為乙腈-水4∶1-乙酸 鈉緩沖溶液pH6.5-乙腈97∶3，梯度洗脫為0～8min，100%～92.5%B；8～20min，92.5%B；20～22min，92.5%～76%B；22～37min，76%B；37～40min，76%～70%B；40～45min，70%B；45～52min，70%～0B，檢測波長254nm，流速1mL·min^－1，柱溫30℃，進樣量20μL。

4.根據權利要求3所述的柴胡及其炮制品中氨基酸的含量測定方法，其特征在于，S3測定柴胡炮制前后氨基酸的含量包括以下步驟：

線性關系測定：將17種氨基酸混合對照品溶液，稀釋配置成5個梯度混標，以峰面積對質量濃度進行回歸處理，計算線性回歸方程；

精密度試驗測定：精密吸取步驟S101下的混合對照品溶液，連續重復進樣6次，結果各氨基酸峰面積RSD0.1%～1.5%，用于確定儀器精密度良好；

穩定性試驗：取步驟S101下的同一份供試品溶液，分別在制備后0h，2h，4h，6h，8h，12h，24h按色譜柱流動相梯度洗脫參數測定，其中各氨基酸峰面積RSD0.3%～1.1%，用于確定供試品溶液在24h內穩定；

重復性試驗：取同一柴胡樣品6份，分別按步驟S103下方法制備供試品溶液，按色譜柱流動相梯度洗脫參數測定，其中各氨基酸含量RSD0.2%～1.1%；

樣品測定：取柴胡生、制品適量，分別按步驟S102下方法制備供試品溶液，按色譜柱流動相梯度洗脫參數測定測定，每個樣品平行3份，每份測定3次，獲取樣品參數信息。