[發明專利]一種鮑氏不動桿菌黃嘌呤脫氫酶突變體及其應用

在審

• 申請號: 201911098145.9
• 申請日: 2019-11-12
• 公開（公告）號: CN110846289A
• 公開（公告）日: 2020-02-28
• 發明（設計）人: 王成華;朱春燕;張婷;張冉
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司 45104
• 代理人: 黃永校

1.一種鮑氏不動桿菌黃嘌呤脫氫酶突變體，該突變體酶是由ɑ亞基和β亞基構成，其特征在于：所述ɑ亞基的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述β亞基的氨基酸序列如SEQ IDNO：2所示。

2.根據權利要求1所述的鮑氏不動桿菌黃嘌呤脫氫酶突變體，該突變體酶是由ɑ亞基和β亞基構成，其特征在于：所述ɑ亞基為如下(a1)-(a4)中任一；所述β亞基為如下(b)；

(a1)所述ɑ亞基的氨基酸序列為序列表中序列1的第296位的苯丙氨酸替換為亮氨酸后得到的氨基酸序列；

(a2)所述ɑ亞基的氨基酸序列為序列表中序列1的第351位的絡氨酸替換為丙氨酸后得到的氨基酸序列；

(a3)所述ɑ亞基的氨基酸序列為序列表中序列1的第392位的絲氨酸替換為丙氨酸后得到的氨基酸序列；

(a4)所述ɑ亞基的氨基酸序列為序列表中序列1的第388位的丙氨酸和第389位的天冬氨酸之間插入由GHFCGLLQLSKRFEQ組成的15個氨基酸多肽片段后得到的氨基酸序列；

(b)所述β亞基的氨基酸序列為序列表中序列2所示的序列。

3.編碼權利要求1所述蛋白質的DNA分子。

4.根據權利要求3所述的DNA分子，其特征在于：所述DNA分子包括所述ɑ亞基的編碼基因和所述β亞基的編碼基因。

5.根據權利要求3-4所述的DNA分子，其特征在于：所述基因為如下1)-8)中任一所示DNA分子：

1)將序列表中序列4的第886-888位的ttt替換為ctg后所得序列所示DNA分子；

2)將序列表中序列4的第886-888位的ttt替換為ctg后所得序列的第1-1500位所示DNA分子；

3)將序列表中序列4的第1051-1053位的tat替換為gca后所得序列所示DNA分子；

4)將序列表中序列4的第1051-1053位的tat替換為gca后所得序列的第1-1500位所示DNA分子；

5)將序列表中序列4的第1174-1176位的tct替換為gca后所得序列所示DNA分子；

6)將序列表中序列4的第1174-1176位的tct替換為gca后所得序列的第1-1500位所示DNA分子；

7)在嚴格條件下與1)-6)中任一所限定的DNA分子雜交且編碼權利要求1所述蛋白的DNA分子；

8)與1)-7)中任一所限定的DNA序列具有90％以上的同源性且編碼權利要求1或2所述蛋白質的DNA分子。

6.含有權利要求3-5中任一所述DNA分子的重組載體、表達盒、宿主細胞或重組菌。

7.權利要求1所述的蛋白質在作為黃嘌呤氧化酶中的應用。

8.根據權利要求6所述的應用，其特征在于降解含次黃嘌呤和/或黃嘌呤，以及降解含有次黃嘌呤和/或黃嘌呤的材料中的應用。

9.權利要求2-5中任一所述DNA分子或權利要求6或7所述的重組載體、表達盒、宿主細胞或重組菌在如下任一中的應用：

(a)制備具有黃嘌呤氧化酶活性的產品；

(b)制備既具有黃嘌呤氧化酶活性，也具有黃嘌呤脫氫酶活性的產品。

10.一種制備權利要求1所述蛋白質的方法，是將權利要求3-5中任一所述的核酸分子導入大腸桿菌進行誘導表達，得到所述蛋白質。