[發(fā)明專利]一種氧化石墨烯載羥基喜樹堿納米靶向藥物的制備和應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201911092227.2
• 申請日: 2019-11-08
• 公開（公告）號: CN111588864A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許媛媛;苗晉鋒;黎偉中
• 申請（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/59;A61K47/64;A61K47/68;A61K31/4745;A61K49/00;A61P15/14;B82Y5/00;B82Y40/00
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本發(fā)明屬于納米藥物領(lǐng)域，涉及一種氧化石墨烯載羥基喜樹堿納米靶向藥物的制備和應(yīng)用，主要利用氧化石墨烯作為載體通過靶向分子的修飾以及藥物的負載完成納米靶向藥物的制備。實驗利用熒光素標記的Caspase?3特異性底物肽(Pep)、殼聚糖(CS)和Toll樣受體4抗體蛋白(Anti?TLR4)共價修飾的氧化石墨烯(GO)負載羥基喜樹堿(HCPT)制備了GO為載體的納米靶向藥物(GO/CS/Pep/Anti?TLR4/HCPT)，通過檢測GO/CS/Pep/Anti?TLR4/HCPT的載藥能力、載藥效率和不同pH條件下藥物的釋放判斷其藥物負載和釋放性能，通過激光共聚焦實驗驗證了GO/CS/Pep/Anti?TLR4/HCPT的藥物靶向性，通過檢測炎性因子的含量及相關(guān)酶活性觀察GO/CS/Pep/Anti?TLR4/HCPT的療效。該納米靶向藥物穩(wěn)定性好，可用于牛乳腺炎的治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種氧化石墨烯載羥基喜樹堿納米靶向藥物的制備和應(yīng)用，屬于納米藥 物領(lǐng)域。

背景技術(shù)

奶牛乳腺炎大多是乳腺遭到病原微生物感染、機械性損傷、物理化學變化及乳腺組 織內(nèi)生理代謝紊亂等引起的一種綜合癥，包括乳腺感染和炎癥、微循環(huán)和免疫功能障礙等。 奶牛乳腺炎是在世界范圍內(nèi)影響奶牛生產(chǎn)飼養(yǎng)及乳制品質(zhì)量的一種復雜多病原性疾病，發(fā)病 率高，其對奶牛生產(chǎn)業(yè)及相關(guān)食品行業(yè)造成重大的經(jīng)濟損失。據(jù)統(tǒng)計，世界范圍內(nèi)每年因奶 牛乳腺炎造成高達百億美元的損失。

現(xiàn)今治療乳腺炎的方法相對比較單一，向乳腺內(nèi)注射抗生素是常用的方法。但是抗 生素的濫用及超級細菌的出現(xiàn)使得奶牛乳腺炎的治療愈加困難。羥基喜樹堿(HCPT)是從植 物中提取的一類天然活性成分，具有抗炎和抗癌的功效，作為一種天然抗炎藥，可以用于治 療炎癥性疾病，但由于其水溶性差，限制其推廣利用。

氧化石墨烯(GO)具有尺寸小、比表面積大及生物相容性好的優(yōu)點。與原始氧化石墨烯相比，GO表面有大量含氧基團，如其平面上含有-OH和C-O-C，而在其片層邊緣含有C ＝O和COOH，這些基團可以與各種聚合物、金屬和生物分子通過酰胺化、酯化作用及加成 反應(yīng)修飾到羧化GO的表面。由于獨特的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，GO已經(jīng)得到國內(nèi)外學者的關(guān)注，被廣 泛的應(yīng)用在藥物輸送、生物成像、基因和癌癥治療以及臨床檢驗等各方面。

本發(fā)明利用GO作為載體負載HCPT，提高羥基喜樹堿的有效藥物濃度，同時，通過在GO表面修飾靶向分子，特異性的進行高生物相容性和低的組織細胞毒性的GO納米靶向藥物運送到炎癥細胞。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于制備一種氧化石墨烯載羥基喜樹堿納米靶向藥物，并將其初步應(yīng) 用于乳腺炎癥細胞的治療。

本發(fā)明的技術(shù)方案：一種氧化石墨烯載羥基喜樹堿納米靶向藥物的制備，利用熒光 素標記的Caspase-3特異性底物肽(Pep)、殼聚糖(CS)、Toll樣受體(TLR)4抗體蛋白(Anti-TLR4)共價修飾GO負載HCPT，構(gòu)建了GO納米靶向藥物 (GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT)。

方法包括以下步驟：GO/CS的制備、GO納米靶向載體(GO/CS/Pep/Anti-TLR4)的 制備、GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT的制備、載藥能力和載藥效率的檢測、HCPT藥物釋放的 檢測、藥物靶向性檢測、炎癥因子含量及相關(guān)酶活性檢測。

(1)GO/CS的制備

取50mg的GO粉末加入25mL三蒸水制成懸浮液，將懸浮液在400Hz的細胞破碎 儀中超聲分散3h制備成濃度為2mg/mL的GO溶液；在超聲狀態(tài)下逐漸加入溶于300μL含 45mg EDC和25mg NHS的溶液活化4h，25mL1mg/mL的CS溶液超聲1h后在室溫下磁 力攪拌24h，將上述制備的懸浮液在4 000g 30min下超濾3次，用雙蒸水分散成1mg/mL GO/CS溶液置于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)GO/CS/Pep/Anti-TLR4的制備