[發明專利]一種氧化石墨烯載羥基喜樹堿納米靶向藥物的制備和應用

在審

• 申請號: 201911092227.2
• 申請日: 2019-11-08
• 公開（公告）號: CN111588864A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 許媛媛;苗晉鋒;黎偉中
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/59;A61K47/64;A61K47/68;A61K31/4745;A61K49/00;A61P15/14;B82Y5/00;B82Y40/00
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1.一種氧化石墨烯載羥基喜樹堿納米靶向藥物的制備和應用，其特征是利用氧化石墨烯GO作為載體通過靶向分子的修飾以及藥物的負載完成納米靶向藥物的制備，實驗利用熒光素標記的Caspase-3特異性底物肽Pep、殼聚糖CS和Toll樣受體4抗體蛋白Anti-TLR4共價修飾的GO負載羥基喜樹堿HCPT制備了GO為載體的納米靶向藥物GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT，通過檢測GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT的載藥能力、載藥效率和不同pH條件下藥物的釋放判斷其藥物負載和釋放性能，通過激光共聚焦實驗驗證了GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT的藥物靶向性，通過檢測炎性因子的含量及相關酶活性觀察GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT的療效。

2.根據權利要求1所述的一種氧化石墨烯載羥基喜樹堿納米靶向藥物的制備和應用，其特征是利用GO作為載體通過靶向分子的修飾以及藥物的負載完成納米靶向藥物的制備。

3.根據權利要求1所述的一種氧化石墨烯載羥基喜樹堿納米靶向藥物的制備和應用，其特征是Pep、CS和Anti-TLR4共價修飾的GO負載HCPT，從而制備了GO為載體的納米靶向藥物，即GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT，試驗首先取50mg的GO粉末加入25mL三蒸水制成懸浮液，將懸浮液在400Hz的細胞破碎儀中超聲分散3h制備成濃度為2mg/mL的GO溶液；在超聲狀態下逐漸加入溶于300μL含45mg EDC和25mg NHS的溶液活化4h，25mL1mg/mL的CS溶液超聲1h后在室溫下磁力攪拌24h，將上述制備的懸浮液在4 000g 30min下超濾3次，用雙蒸水分散成1mg/mL GO/CS溶液；取40mL GO/CS溶液加入300μL含10mg EDC和含5mg NHS的溶液活化3h，用1mM NaOH將活化后的GO/CS溶液pH調至8.0，再加溶于100μL含2mg Pep和10μL 0.6mg/mL的Anti-TLR4溶液，室溫下避光攪拌反應24h，超濾3次除去多余的物質純化產物，用雙蒸水溶解成1mg/mL的GO納米載體復合物GO/CS/Pep/Anti-TLR4溶液；將1mL 5mM DMSO溶解的HCPT藥物與9mL1mg/mL的GO/CS/Pep/Anti-TLR4溶液室溫避光攪拌24h，超濾3次后用雙蒸水溶解成1mg/mL GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT溶液。

4.根據權利要求1所述的一種氧化石墨烯載羥基喜樹堿納米靶向藥物的制備和應用，其特征是對GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT載藥能力、載藥效率進行檢測確定其載藥性能，首先取1mL未經超濾的GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT，經12 000r/min離心60min，收集上清用紫外可見分光光度計測量267nm處的吸光度，依據HCPT濃度-吸光度標準曲線，計算GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT中HCPT含量，同時，將離心后的固體物真空冷凍干燥后稱重，按照公式LC＝Md/Mc和LE＝Md/Mo×100％計算LC和LE，其中，Md是負載到GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT的HCPT質量，Mc是GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT的質量，Mo是原始溶液中HCPT的質量。

5.根據權利要求1所述的一種氧化石墨烯載羥基喜樹堿納米靶向藥物的制備和應用，其特征是對GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT藥物釋放的PH響應進行檢測確定其藥物釋放性能，實驗首先分別取1mL的1mg/mL的GO/CS/Pep/Anti-TLR4/HCPT溶液裝入30kDa透析袋中并浸入50mL 10mM pH值分別為5.8、7.4、8.0的PBS緩沖液中37℃水浴，分別在2、4、6、8、10、12、24、36、48和72h，收集不同pH值的PBS緩沖液5mL，之后將對應pH值的新鮮PBS緩沖液5mL加入到原釋放介質中，測量收集的pH緩沖液在267nm處的吸光度，依據267nm處的紫外吸光值與HCPT濃度之間的線性方程，計算不同pH條件下各時間點時HCPT的累計釋放。