[發明專利]一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法

有效

• 申請號: 201911090035.8
• 申請日: 2019-11-08
• 公開（公告）號: CN110849795B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 劉曉東;孟川;王明秋;王玉海;牟金貴;馬蕾;吳芳;陳占良
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院經濟作物研究所
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14;G01N33/02;G01N1/28;G01N1/34;G01N1/30;G01N1/38
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 張雪

本發明公開了一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，屬于生物技術領域，所述方法為配制提取緩沖液；取大白菜子葉，放入培養皿中，加入提取緩沖液，進行解離，切碎，得到混合物；用移液槍吸取混合物后放入離心管中，進行離心處理，棄去上清液；加入染色液，放入流式細胞儀檢測大白菜倍性，以二倍體品種作為對照，每個樣品做3次重復為一次對照。本發明選用大白菜子葉來進行流式細胞儀倍性檢測，成功解決了利用流式細胞儀鑒定大白菜倍性出現倍性漂移的問題。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法。

背景技術

大白菜是主要的十字花科蔬菜之一，大白菜育種包括：雜交育種、自交育種這兩種形式。鑒于當前存在的大白菜種質資源的同質化，創新困難，新手段、新技術的研發成為大白菜育種的迫切需求，目前人們著手于四倍體大白菜育種的研究。

在四倍體資源創新過程中，對資源材料的鑒定通常采用顯微鏡鏡檢的方式，該方法存在的不足是：耗時長、效率低、視野存在局限性，藥品毒性危害等。

當前流式細胞儀在動植物學方面被廣泛運用。流式細胞儀是一種簡單快速高通量檢測植物倍性水平、種內雜交、單性生殖，以及基因組的大小，多倍體和染色體的方法。對高速直線流動的細胞或生物微粒進行快速定量測定和分析的儀器，主要包括樣品的液流技術、細胞的計數和分選技術，計算機對數據的采集和分析技術等。特點是：測量速度快、被測群體大、可進行多參數測量，即對同一個細胞做有關物理、生物化學特性的多參數測量。流式細胞儀在作物的檢測中發揮了重要的作用。

流式細胞儀在檢測其他蔬菜上的成功應用，如:甘藍、菜花、油麥菜、黃瓜、番茄、土豆、菠菜、蘿卜生菜、西葫蘆、茴香、草莓等作物進行了對比。通過峰值圖(圖1～圖12)可以得知流式細胞儀在其他作物上的運用結果相對比較準確且峰值清晰，雜質少，可明顯看出其倍性。

但是流式細胞儀在大白菜倍性檢測中出現了問題：流式細胞儀在檢測四倍體大白菜的過程中出現了倍性漂移的問題。如：四倍體大白菜在流式細胞儀檢測中出現了較高二倍體峰值，在檢測不同的葉片(外葉、內葉及第一片真葉)中也會出現倍性漂移的現象并且雜峰多，主峰值相對不明顯等問題。

因此，現如今急需建立一種基于流式細胞儀檢測的快速鑒定大白菜倍性的可靠方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，以解決上述流式細胞儀檢測大白菜倍性時出現的倍性漂移問題。

目前，流式細胞儀在檢測除大白菜之外的其他蔬菜的倍性上具有成功應用，本發明對以下幾種蔬菜：甘藍、菜花、油麥菜、黃瓜、番茄、土豆、菠菜、蘿卜生菜、西葫蘆、茴香、草莓等作物的倍性檢測進行了對比。通過以下數值圖(表1)和峰值圖(圖1～圖12)，可以得知流式細胞儀在其他作物上的運用結果相對比較準確且峰值清晰，雜質少，可明顯看出其倍性。

表1

流式細胞儀在檢測四倍體大白菜的過程中出現了倍性漂移的問題：如：四倍體大白菜在流式細胞儀檢測中出現了較高二倍體峰值，在檢測不同的葉片(外葉、內葉及第一片真葉)中也會出現倍性漂移的現象并且雜峰多，主峰值相對不明顯等問題(參見表2和圖13～21)。

表2

為解決流式細胞儀檢測大白菜倍性時出現的倍性漂移問題，本發明提供了如下方案：

本發明提供了一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，以大白菜的子葉進行檢測。

進一步的，利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，包括以下步驟：

(1)配制提取緩沖液；