[發明專利]一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法有效
| 申請號： | 201911090035.8 | 申請日： | 2019-11-08 |
| 公開（公告）號： | CN110849795B | 公開（公告）日： | 2022-04-26 |
| 發明（設計）人： | 劉曉東;孟川;王明秋;王玉海;牟金貴;馬蕾;吳芳;陳占良 | 申請（專利權）人： | 河北省農林科學院經濟作物研究所 |
| 主分類號： | G01N15/14 | 分類號： | G01N15/14;G01N33/02;G01N1/28;G01N1/34;G01N1/30;G01N1/38 |
| 代理公司： | 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 張雪 |
| 地址： | 050051 河北省石*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 細胞 快速 檢測 大白菜 方法 | ||
1.一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，其特征在于，以大白菜的子葉進行檢測；
子葉采取時期為大白菜子葉展開到第一片真葉展開之間。
2.根據權利要求1所述的一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)配制提取緩沖液；
(2)取大白菜子葉，放入培養皿中，加入步驟(1)配制的提取緩沖液，進行解離，切碎，得到混合物；
(3)用移液槍吸取過濾步驟(2)中的混合物后放入離心管中，進行離心處理，棄去上清液；
(4)加入染色液，放入流式細胞儀中檢測大白菜倍性，以二倍體品種作為對照，每個測試樣品3次重復。
3.根據權利要求2所述的一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，其特征在于，所述提取緩沖液為Tris-HCl溶液、KCl溶液、NaCl溶液、EDTA-Na2、巰基乙醇與Triton X-100的混合液。
4.根據權利要求3所述的一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，其特征在于，所述提取緩沖液為Tris-HCl溶液、KCl溶液、NaCl溶液、EDTA-Na2溶液、巰基乙醇溶液與Triton X-100的混合液中各物質的質量比為1:4:1:1:2:1。
5.根據權利要求4所述的一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，其特征在于，所述緩沖提取液的配制方法為：
(1)Tris-HCl溶液稱取1.82g，加水至950ml，調pH至7.5，KCl溶液稱取5.96g/L，NaCl溶液稱取1.17g/L，EDTA-Na2稱取7.45g/L，巰基乙醇吸取1050ul/L，Triton X-100吸取500ul/L；
(2)將步驟(1)稱好/吸取的藥品依次倒入定容好950mL的溶液中，加蒸餾水至1000mL,攪拌直至溶解，用300目尼龍過濾網過濾備用。
6.根據權利要求2所述的一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，其特征在于，每1cm2子葉，加入1-3mL提取緩沖液。
7.根據權利要求2所述的一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，其特征在于，所述染色液為DAPI染色液、核糖核酸酶A與1×PBS緩沖液組成的混合液，染色液DAPI與核糖核酸酶A的比例為2000:1，1XPBS緩沖液定容100mL,備用。
8.根據權利要求7所述的一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，其特征在于，所述染色液的配制過程為：
(1)取DAPI染色液終濃度為1mg/ml；核糖核酸酶A終濃度0.05mg/ml，1×PBS緩沖液定容至100mL；
(2)用300目尼龍過濾網過濾兩次直至沒有沉淀，放入棕色瓶中備用。
9.根據權利要求2所述的一種利用流式細胞儀快速檢測大白菜倍性的方法，其特征在于，步驟(3)離心時間2-3min。
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