[發(fā)明專利]一種花生腐爛病病原真菌的致病性鑒定方法

在審

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• 申請日: 2019-11-08
• 公開（公告）號: CN110669819A
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發(fā)明（設計）人: 王冕;張朝昕;陳明娜;王通;潘麗娟;許靜;禹山林;遲曉元;陳娜
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省花生研究所;青島市環(huán)境衛(wèi)生發(fā)展中心
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18
• 代理公司: 11340 北京天奇智新知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 陳嵐崴

本發(fā)明公開了一種花生腐爛病病原真菌的致病性鑒定方法，屬于病原真菌致病性鑒定技術領域。本發(fā)明致病性鑒定方法是將感病花生品種的種子和不同組織分別經(jīng)消毒、沖洗、微創(chuàng)處理后，接入病原真菌菌絲體塊，使病原真菌與花生種子和花生不同組織實現(xiàn)共培養(yǎng)，5天后觀察侵染致病情況。本發(fā)明方法能夠隨時對腐爛病病原真菌的致病性進行檢測，快速簡便、穩(wěn)定性高、重復性好，有利于快速鑒定大量花生抗病種質(zhì)資源，對花生抗病品種選育及腐爛病防控研究具有重要意義。

技術領域

本發(fā)明屬于病原真菌致病性鑒定技術領域，具體涉及一種花生腐爛病病原真菌的致病性鑒定方法。

背景技術

花生是一種在地上開花，形成果針后鉆到地里結(jié)果的喜溫豆科作物，是世界范圍內(nèi)廣泛種植的油料和經(jīng)濟作物。但因其地下結(jié)果的特性，易受土傳病害的影響。已報道的花生土壤侵染性病害有多種，包括真菌性病害、細菌性病害和線蟲病害等。其中真菌病害主要有莖腐病、根腐病、果腐病等。這些真菌性病害往往導致花生苗期死亡或者地下根果腐爛。因真菌性病害導致的花生大面積腐爛減產(chǎn)甚至絕收多有報道，且在北方產(chǎn)區(qū)有連年加重之勢，因此花生腐爛病病原真菌的篩選、培養(yǎng)和致病性研究變得尤為重要，它是研究花生抗真菌性腐爛病機制和選育抗病品種的前提和基礎，也是防控花生腐爛病的關鍵。

目前，花生病原真菌致病性鑒定方法多采用田間試驗及盆栽回接方法；而該檢測方法周期長，受外界環(huán)境制約性大；花生病原真菌致病性的快速鑒定方法對花生抗病性種質(zhì)篩選具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種花生腐爛病病原真菌的致病性鑒定方法，該方法快速簡便、穩(wěn)定性高、重復性好，克服了田間及盆栽回接檢測受種植周期限制且檢測周期長的缺陷。

為了達到上述目的，本發(fā)明采用的技術方案如下：

一種花生腐爛病病原真菌的致病性鑒定方法，將感病花生品種的種子和不同組織分別經(jīng)消毒、沖洗、微創(chuàng)處理后，接入病原真菌菌絲體塊，使病原真菌與花生種子和花生不同組織實現(xiàn)共培養(yǎng)，5天后觀察侵染致病情況。

在上述方案的基礎上，所述花生腐爛病病原真菌為尖孢鐮孢菌。

在上述方案的基礎上，所述尖孢鐮孢菌為尖鐮孢菌Hs-f，于2019年08月29日保藏于：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC NO:18130，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，請求保藏單位為山東省花生研究所。

在上述方案的基礎上，所述尖孢鐮孢菌Hs-f由以下方法培養(yǎng)而成：

(1)菌種活化：用挑取凍存菌株接種于5ml PDA液體培養(yǎng)基中，25℃、180rpm震蕩培養(yǎng)8h；

(2)富集培養(yǎng)：上述活化后的5ml培養(yǎng)液移入50ml PDA液體培養(yǎng)基中，25℃、180rpm震蕩培養(yǎng)過夜；

(3)擴大培養(yǎng)：取1ml所述的富集培養(yǎng)液，涂布于PDA培養(yǎng)基平板上，晾干后，重復涂布兩次，待晾干后置于25℃暗培養(yǎng)過夜。

在上述方案的基礎上，所述的凍存菌株是由分離純化的單菌落經(jīng)快速傳代至50代，保存的致病性穩(wěn)定的菌株。

所述的快速傳代是指：

(1)挑取單菌落接種于5ml PDA液體培養(yǎng)基中，25℃、180rpm震蕩培養(yǎng)8h；

(2)取5ml(1)中的培養(yǎng)液移入50ml PDA液體培養(yǎng)基中，25℃、180rpm震蕩培養(yǎng)過夜；

(3)最后將(2)中的培養(yǎng)液，涂布于PDA培養(yǎng)基平板上，晾干后，重復涂布兩次，待晾干后25℃暗培養(yǎng)過夜；

(4)重復(1)～(3)將其傳代至50代。

在上述方案的基礎上，所述感病花生品種為花育20號。