[發明專利]一種應用數字PCR檢測HER2基因擴增的試劑盒

在審

• 申請號: 201911088231.1
• 申請日: 2019-11-08
• 公開（公告）號: CN110669843A
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發明（設計）人: 金鑫浩;劉一博;隋碩;任魯風;張未來;俞育德;于軍
• 申請（專利權）人: 寧波胤瑞生物醫學儀器有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851
• 代理公司: 11470 北京精金石知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉俊玲

本發明屬于HER2基因擴增檢測試劑技術領域，具體涉及一種應用數字PCR檢測HER2基因擴增的試劑盒。所述試劑盒包括引物探針預混液，所述引物探針預混液中包括1)檢測HER2基因的上下游引物、檢測HER2基因的熒光探針；2)檢測人FAS基因的上下游引物、檢測人FAS基因的熒光探針；3)檢測人ACTB基因的上下游引物、檢測人ACTB基因的熒光探針。本發明提供的HER2基因擴增檢測試劑盒，與實時熒光定量PCR相比，可以進行絕對定量，且檢測下限明顯低于熒光定量PCR。而且該試劑盒的引物探針組合，特異性高，檢測效果更好。

技術領域

本發明屬于HER2基因擴增檢測試劑技術領域，具體涉及一種應用數字PCR檢測HER2基因擴增的試劑盒。

背景技術

人類HER-2/neu基因(Her-2基因)基因定位于染色體17q21，其編碼產物為185kD的跨膜精蛋白p185，由1255個氨基酸組成，720—987位屬于酪氨酸激酶區。Her-2/neu蛋白是具有酪氨酸蛋白激酶活性跨膜糖蛋白，是EGFR家族成員之一。人表皮生長因子受體2(HER2，ERBB2)的過量表達和許多上皮細胞癌癥的惡化程度密切相關。HER2高表達的腫瘤表現出強的轉移能力和侵潤能力，對化療的敏感性也較差，且易復發。在正常細胞中HER2的表達水平非常低，但是在胚胎發育期表達量非常高，對發育過程的細胞增殖、分化、遷移等起重要的作用。

尋找有效的治療手段一直是腫瘤學界研究的方向。現在已知，大約25-30％的乳腺癌有HER2基因擴增。此外，不同比例的卵巢癌，前列腺癌，胃癌及肺癌也可能有HER2過度表達的現象存在。正確檢測和評定乳腺癌的HER2基因擴增狀態對乳腺癌的臨床治療和預后判斷至關重要。赫賽汀(Herceptin)于1998年首次獲批，它作為一種免疫治療藥物，能特異性地抑制具有HER2癌基因擴增的癌細胞的生長，使病人預后大大改善。2012年6月8日，新的乳腺癌藥物Perjeta獲得FDA的批準，在臨床試驗中，與現有標準護理相比，Perjeta使癌癥的惡化推遲了額外6個月。但與Herceptin相同，此藥物也僅適用于HER2擴增陽性的乳腺癌患者。因此可知，癌細胞HER2基因擴增是決定Herceptin和Perjeta是否有效的關鍵性指標。

現階段國內外一般采用免疫組織化學(IHC)法檢測HER2受體蛋白表達狀態和熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，FISH)法檢測HER2基因擴增水平。其中IHC檢測結果只能作為前期初步篩查使用，IHC檢測具有成本低、技術簡單、便于操作等特點，常是臨床檢測的首選。但IHC容易受到組織影響，缺乏標準化，結果判斷存在主觀差異，造成不同實驗室之間的IHC檢測結果可能存在差異。HER2的FISH檢測具有較高的準確性、靈敏度和特異性，其結果在不同實驗室間一致性較高，目前是檢測HER2基因擴增的“金標準”。但是FISH存在儀器價格昂貴、檢測周期長、患者收費高、檢測者專業知識和實驗室條件的限制，檢測試劑一直被國內或國外1、2個廠家所壟斷，只能在具有資質的大醫院進行，造成大量人員不能得到及時的診斷而失去個體化用藥的機會，因此急需一種高靈敏度、準確度、易于操作標準化、多樣化檢測等優勢檢測方法。目前使用的FISH和IHC的方法，但是FISH存在一起價格昂貴、檢測周期長、患者收費高、檢測者專業知識和實驗室條件的限制，不利于廣泛應用。IHC也具有操作繁瑣、觀察結果不便等缺點，故提出此發明。

發明內容

為了解決現有技術中的上述問題，本申請的發明目的在于提供一種應用數字PCR檢測HER2基因擴增的試劑盒。該試劑盒可對腫瘤組織中的HER2基因擴增進行檢測，進行絕對定量。

為了實現上述發明目的，本發明提供如下技術方案：

一種應用數字PCR檢測HER2基因擴增的試劑盒，所述試劑盒包括引物探針預混液，所述引物探針預混液中包括1)檢測HER2基因的上下游引物、檢測HER2基因的熒光探針；2)檢測人FAS基因的上下游引物、檢測人FAS基因的熒光探針；3)檢測人ACTB基因的上下游引物、檢測人ACTB基因的熒光探針；