[發(fā)明專(zhuān)利]用于鯉魚(yú)線(xiàn)粒體DNA片段擴(kuò)增的引物組合及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911087606.2
• 申請(qǐng)日: 2019-11-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110846381A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-02-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董傳舉;姜洲;張猛;王良炎;李學(xué)軍;孔勝楠
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 河南師范大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6806
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6806;C12N15/11
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11369
• 代理人: 卞靜靜

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于鯉魚(yú)線(xiàn)粒體DNA片段擴(kuò)增的引物組合，包括如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:38所示的19組引物對(duì)。本發(fā)明還公開(kāi)了一種方法，包括：1)獲得待測(cè)鯉魚(yú)樣本的總DNA；2)以總DNA為模板，采用引物對(duì)分別進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物；3)測(cè)序獲得序列信息。本發(fā)明還公開(kāi)了該引物組合于科學(xué)研究中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)提供特定靈敏性和高特異性的引物，避免了非特異性擴(kuò)增的發(fā)生，可方便快捷、準(zhǔn)確地對(duì)鯉的線(xiàn)粒體DNA進(jìn)行擴(kuò)增并擴(kuò)增出19個(gè)片段，最終拼接完成后可得到鯉魚(yú)的完整線(xiàn)粒體DNA，長(zhǎng)度達(dá)到16580bp左右。本發(fā)明可為鯉的遺傳物質(zhì)研究提供極大的便利。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及用于鯉魚(yú)線(xiàn)粒體DNA片段擴(kuò)增的引物組合及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

鯉魚(yú)(Cyprinus carpio L.)目前有100多個(gè)國(guó)家和地區(qū)養(yǎng)殖，年產(chǎn)量400萬(wàn)噸以上，是最重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖種之一。我國(guó)是最大的鯉養(yǎng)殖國(guó)和消費(fèi)國(guó)，年產(chǎn)量302萬(wàn)噸，占世界總產(chǎn)量的80％。鯉魚(yú)作為一種重要模型物種，也廣泛應(yīng)用于環(huán)境毒理學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、生理學(xué)、免疫學(xué)以及進(jìn)化基因組學(xué)等領(lǐng)域的研究。因此，在過(guò)去十幾年間，大量鯉魚(yú)基因組資源被廣泛開(kāi)發(fā)，包括遺傳標(biāo)記、遺傳圖譜、BAC數(shù)據(jù)庫(kù)、ESTs以及轉(zhuǎn)錄組序列等。

因此用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)將鯉魚(yú)線(xiàn)粒體DNA序列擴(kuò)增出來(lái)，可以為鯉魚(yú)的遺傳和進(jìn)化研究提供科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)在獲取鯉魚(yú)DNA序列的方法主要是引物擴(kuò)增然后測(cè)序，但存在的最大問(wèn)題就是引物靈敏度和特異性較差，經(jīng)常出現(xiàn)錯(cuò)配、非特異性擴(kuò)增或擴(kuò)增不出條帶等現(xiàn)象。因此，這一技術(shù)的關(guān)鍵是采用盡可能少的引物組合在適合的條件下擴(kuò)增，得到完整的線(xiàn)粒體DNA片段。亟需一種簡(jiǎn)捷方便、靈敏性高、特異性強(qiáng)、結(jié)果可靠的擴(kuò)增方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問(wèn)題和/或缺陷，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供了一種用于鯉魚(yú)線(xiàn)粒體DNA片段擴(kuò)增的引物組合。本發(fā)明通過(guò)設(shè)計(jì)特定靈敏性和高特異性的引物，避免了非特異性擴(kuò)增的發(fā)生。本發(fā)明用盡可能少的引物組合擴(kuò)增出完整的鯉魚(yú)線(xiàn)粒體DNA片段，為鯉魚(yú)的遺傳研究提供方便。

為此，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：