[發明專利]全長啟動子質粒PGL3-TREM-1的構建方法、其調控方法及其轉錄因子的篩選方法有效
| 申請號： | 201911085329.1 | 申請日： | 2019-11-08 |
| 公開（公告）號： | CN110699372B | 公開（公告）日： | 2023-01-13 |
| 發明（設計）人： | 段練;高文曦;朱丹丹;沈培;張天宇;段義農 | 申請（專利權）人： | 南通大學 |
| 主分類號： | C12N15/66 | 分類號： | C12N15/66;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 徐思波 |
| 地址： | 226019 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 全長 啟動子 質粒 pgl3 trem 構建 方法 調控 及其 轉錄 因子 篩選 | ||
【權利要求書】：
1.一種構建的全長啟動子質粒PGL3-TREM-1的調控方法，其特征在于，所述全長啟動子質粒PGL3-TREM-1的構建方法如下所示，收集小鼠肝臟組織，抽提小鼠肝臟組織的DNA，并以所抽取的DNA為模板及根據序列號：ENSMUSG00000042265 的序列所設計的TREM-1啟動子特異性引物進行PCR，獲得的PCR產物連接至PGL3-Basic載體，連接產物轉化至DH5α感受態細胞，獲得的陽性克隆進行酶切、PCR及測序鑒定，對所構建的PGL3-TREM-1進行活性鑒定，PGL3-TREM-1構建成功；
根據調控需求選擇抑制方法或增強方法，具體包括，a. 抑制方法：將PGL3-TREM-1質粒轉染至RAW264.7細胞，并經rSjP40處理，熒光素酶活性檢測試劑盒檢測PGL3-TREM-1啟動子活性，PGL3-TREM-1啟動子活性降低；b. 增強方法：將PGL3-TREM-1質粒轉染至RAW264.7細胞，經作為作為陽參的LPS刺激后，熒光素酶活性檢測試劑盒檢測PGL3-TREM-1啟動子活性，PGL3-TREM-1啟動子活性增強。
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