[發明專利]一種鑒別冬蟲夏草及其商品真偽PCR引物、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201911082647.2
• 申請日: 2019-11-07
• 公開（公告）號: CN110894537B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 周華;程春松;崔顥;裴文菡
• 申請（專利權）人: 澳門科技大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭晨鳴

1.一組鑒別冬蟲夏草真偽的PCR引物，引物的核苷酸序列如下所示：

擴增條帶出現495bp，則說明是真的冬蟲夏草，未出現495bp則說明樣品是偽冬蟲夏草，擴增條帶出現為180bp，則說明是北蟲草或蛹蟲草；擴增條帶出現為397bp，則說明是僵蠶；擴增條帶出現為480bp，則說明是金蟬花；擴增條帶出現為610bp，則說明是亞香棒蟲草；擴增條帶出現為154bp，則說明是涼山蟲草；擴增條帶出現為510bp，則說明是新疆蟲草；擴增條帶出現為495和180bp，則說明是真的冬蟲夏草摻有北蟲草。

2.一種鑒別冬蟲夏草真偽的PCR試劑盒，其特征在于：該試劑盒含有權利要求1所述的引物。

3.一種鑒別冬蟲夏草真偽的PCR方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)從樣品中提取DNA；

2)以提取的DNA為模板，用權利要求1所述的引物對進行PCR擴增反應；

3)根據電泳條帶的分布情況或添加染料后的情況，確定待測樣品中冬蟲夏草的真偽；步驟1)提取DNA的步驟為：在樣品中加入NaOH溶液裂解30s～1min。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述樣品和NaOH的質量比為5mg～1g：0.4g～80g。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述NaOH的工作終濃度為0.5M～5M。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟2)中的PCR擴增反應體系為：

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟2)中PCR擴增反應程序為：94℃預變性4min；94℃變性30s，65℃退火30s，72℃延伸30s，循環35次。

8.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟3)中所述確定待測樣品中冬蟲夏草的真偽過程為：擴增條帶出現495bp，則說明是真的冬蟲夏草，未出現495bp則說明樣品是偽冬蟲夏草。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：所述確定待測樣品中冬蟲夏草的真偽過程為：擴增條帶出現為180bp，則說明是北蟲草或蛹蟲草；擴增條帶出現為397bp，則說明是僵蠶；擴增條帶出現為480bp，則說明是金蟬花；擴增條帶出現為610bp，則說明是亞香棒蟲草；擴增條帶出現為154bp，則說明是涼山蟲草；擴增條帶出現為510bp，則說明是新疆蟲草；擴增條帶出現為495和180bp，則說明是真的冬蟲夏草摻有北蟲草。