[發(fā)明專利]微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇中代謝物的高效液相檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911079194.8
• 申請日: 2019-11-07
• 公開（公告）號: CN111089914A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張春悅;范義文;鄭孟北;王永祥;姚連孟;曹亞楠;趙壹浩;宗福寶
• 申請（專利權(quán)）人: 河北首朗新能源科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34
• 代理公司: 北京華沛德權(quán)律師事務(wù)所 11302
• 代理人: 馬苗苗

1.一種含CO氣體微生物發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇中代謝物的高效液相檢測方法，通過高效液相色譜分析，測定微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的發(fā)酵液中代謝物的含量，所述代謝物包括乙醇、乙酸、乳酸和2，3-丁二醇，其特征在于，所述色譜條件為：

色譜柱：Alltech IOA-2000 Organic Acid色譜柱；

流動相：硫酸濃度4-6mmol/L，溶劑為超純水；

流速：0.5-1mL/min；

柱溫：50-60℃；

檢測器：RID；

運(yùn)行時間：9-11min。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含CO氣體微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇中代謝物的高效液相檢測方法，其特征在于，所述色譜條件為：

色譜柱：Alltech IOA-2000 Organic Acid色譜柱；

流動相：硫酸濃度5mmol/L，溶劑為超純水；

流速：0.7mL/min；

柱溫：55℃；

檢測器：RID；

運(yùn)行時間：10min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇中代謝物的高效液相檢測方法，其特征在于，所述高效液相色譜分析中，進(jìn)樣體積為9-11μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇中代謝物的高效液相檢測方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

S1：配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，所述標(biāo)準(zhǔn)溶液為乙醇、乙酸、乳酸和2，3-丁二醇的混合溶液；

S2：采用高效液相色譜儀，分別對各標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行液相色譜分析，記錄分析得到的峰面積，并采用外標(biāo)法分別繪制乙醇、乙酸、乳酸和2，3-丁二醇的含量-峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程；

S3：采用與標(biāo)準(zhǔn)溶液完全相同的檢測儀器和色譜條件，對待測含有乙醇、乙酸、乳酸和2，3-丁二醇的溶液進(jìn)行液相色譜分析，記錄峰面積，根據(jù)步驟S2中的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算得出所述含有乙醇、乙酸、乳酸和2，3-丁二醇的溶液中乙醇、乙酸、乳酸和2，3-丁二醇的含量。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇中代謝物的高效液相檢測方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)溶液包括第一標(biāo)準(zhǔn)溶液和第二標(biāo)準(zhǔn)溶液，所述第一標(biāo)準(zhǔn)溶液由質(zhì)量濃度分別為30g/L、5g/L、5g/L和10g/L的乙醇溶液、乙酸溶液、乳酸溶液和2，3-丁二醇溶液混合而得，所述第二標(biāo)準(zhǔn)溶液由質(zhì)量濃度分別為15g/L、2.5g/L、2.5g/L和5g/L的乙醇溶液、乙酸溶液、乳酸溶液和2，3-丁二醇溶液混合而得；所述乙醇溶液、乙酸溶液、乳酸溶液和2，3-丁二醇溶液的溶劑為超純水。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇中代謝物的高效液相檢測方法，其特征在于，所述含有乙醇、乙酸、乳酸和2，3-丁二醇的溶液的制備方法如下：

取待測微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的發(fā)酵液，加入5-磺酸水楊酸溶液，混勻后，獲得混合溶液；

5-磺基水楊酸溶液配制方法為：將超純水、濃硫酸和5磺基水楊酸混合均勻，獲得5-磺基水楊酸溶液，所述超純水、濃硫酸和5磺基水楊酸的體積質(zhì)量比為250ml∶13.89ml∶5g；

將所述混合溶液進(jìn)行離心操作，獲得離心清液；所述離心清液為含有乙醇、乙酸、乳酸和2，3-丁二醇的溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇中代謝物的高效液相檢測方法，其特征在于，所述發(fā)酵液與5-磺酸水楊酸溶液的體積比為3-5∶1。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇中代謝物的高效液相檢測方法，其特征在于，所述離心操作轉(zhuǎn)速為12000-18000r/min。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇中代謝物的高效液相檢測方法，其特征在于，所述離心操作時間為≥3min。