[發明專利]用于腫瘤外泌體自校準檢測的雙功能雜化薄膜的制備方法

有效

• 申請號: 201911078972.1
• 申請日: 2019-11-07
• 公開（公告）號: CN110736779B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發明（設計）人: 桂日軍;孫玉嬌;金輝
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: G01N27/416
• 分類號: G01N27/416;G01N27/327;G01N27/31
• 代理公司: 青島高曉專利事務所(普通合伙) 37104
• 代理人: 張世功

1.用于腫瘤外泌體自校準檢測的雙功能雜化薄膜的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟：

(1)二茂鐵摻雜的鈷基金屬有機骨架Fc/ZIF-67復合物的制備：稱取一定量的Co(NO₃)₂·6H₂O和2-甲基咪唑，放置于47mL乙醇和3mL去離子水的混合溶劑中，磁力攪拌下形成均勻的混合液，Co(NO₃)₂·6H₂O和2-甲基咪唑的濃度分別調節至0.1～0.5mol/L和0.8～1.5mol/L；將此混合液加入電解槽中，以Ag/AgCl為參比電極，鉑絲為對電極，氧化銦錫ITO為工作電極，以-5至-10V恒定電壓，循環伏安掃描100～500s，將Fc/ZIF-67復合物電沉積在氧化銦錫ITO電極表面；

(2)黑磷納米片和二茂鐵摻雜的鈷基金屬有機骨架BPNSs/Fc/ZIF-67復合物的制備：稱取10～30mg黑磷晶體加入50mL的1-甲基-2-吡咯烷酮中，在超聲波清洗機中超聲1～6h后，轉入探頭式超聲波發生器中超聲1～4h，產物分散液在12000rpm下離心15min，取上層分散液在5000rpm下離心15min；將制得的黑磷納米片BPNSs分散液，逐滴添加至Fc/ZIF-67復合物表面，自然干燥，在氧化銦錫ITO電極表面制得BPNSs/Fc/ZIF-67復合物；

(3)適體-BPNSs/Fc/ZIF-67雜化薄膜的制備：將BPNSs/Fc/ZIF-67/ITO薄膜電極浸沒在含有1～10μM的CD63跨膜蛋白對應單鏈DNA適體的磷酸鹽水緩沖液中，在37℃下孵育30～120min，取出該薄膜電極，自然干燥，在氧化銦錫ITO電極表面制得適體BPNSs/Fc/ZIF-67復合物，即制得適體-BPNSs/Fc/ZIF-67雜化薄膜；

(4)雜化薄膜傳感器的制備：以雜化薄膜為工作電極，置于電化學工作站的三電極體系中，以磷酸鹽水緩沖液為電解液，加入從乳腺癌MCF-7細胞提取的外泌體，測定不同外泌體濃度下的電化學方波伏安曲線；以修飾在適體鏈上的亞甲基藍MB為響應信號，摻雜在ZIF-67金屬有機骨架內的二茂鐵Fc為參比信號，以電流峰強度I_Fc/I_MB比值為自校準信號輸出，擬合I_Fc/I_MB比值與外泌體濃度之間的線性關系，構建用于外泌體定量檢測的自校準傳感器；其中，腫瘤外泌體濃度的線性檢測范圍為1×10²～1×10⁶particlesμL^–1，檢測限為50～100particles μL^–1。