[發(fā)明專利]基于ASP基因表達量差異鑒定清溪烏鱉品系和日本品系的方法

在審

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• 申請日: 2019-11-06
• 公開（公告）號: CN110878360A
• 公開（公告）日: 2020-03-13
• 發(fā)明（設計）人: 斯越秀;尹尚軍;張麗麗;錢國英
• 申請（專利權）人: 浙江萬里學院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851
• 代理公司: 成都方圓聿聯(lián)專利代理事務所(普通合伙) 51241
• 代理人: 李鵬

本發(fā)明公開了一種基于ASP基因表達量差異鑒定中華鱉清溪烏鱉品系和日本品系的方法，該方法通過對待鑒定中華鱉腹部皮膚ASP基因的表達量進行檢測，若ASP基因相對表達量值≥0.04，則確定為日本品系，若ASP基因相對表達量值＜0.04，則確定為清溪烏鱉品系。本發(fā)明提供了一種快速鑒定中華鱉日本品系和清溪烏鱉品系的方法。可用于中華鱉的遺傳育種中，特別是烏質性狀的選育。

技術領域

本發(fā)明屬于分子生物學領域，具體涉及一種基于ASP基因表達量差異鑒定清溪烏鱉品系和日本品系的方法。

背景技術

中華鱉(Pelodiscus sinensis)是我國重要的名特優(yōu)水產養(yǎng)殖品種，具有高蛋白、低脂肪的營養(yǎng)特點，富含多種維生素和微量元素，營養(yǎng)價值高。中華鱉種質資源是其產業(yè)發(fā)展的源頭，中華鱉日本品系(品種登記號:GS03-001-2007)和清溪烏鱉(品種登記號:GS01-003-2008)是經全國水產原種和良種審定委員會認定并經農業(yè)部公告的國家水產新品種。這2個中華鱉新品種具有各自獨特的外部形態(tài)與生產性能特征，既是養(yǎng)殖生產的優(yōu)良品種，也是中華鱉種質持續(xù)改良的寶貴種質資源。其中中華鱉日本品系背甲似青苔，底板似白玉，生長特別快，是目前全國廣泛飼養(yǎng)的品種；清溪烏鱉最大特征是獨特的烏黑腹部體色，口味、品質和營養(yǎng)價值遠勝于普通鱉，富含具有食用價值和藥用價值的黑色素，是中華鱉遺傳育種研究的優(yōu)良材料，已成為中華鱉各品系中珍貴的種苗品種，其烏質性狀對提升中華鱉養(yǎng)殖效益、促進中華鱉品質改良具有重要的意義。

對于含烏質性狀的物種來說，其食用價值主要在于體內豐富的黑色素，烏質性狀表型更是市場經濟價值提高的關鍵，也是種質資源改良的目標。目前，對烏鱉黑色素合成的調控研究尚未見報道，烏鱉烏質性狀的分子機理有待深入研究。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的技術問題為：如何提供一種中華鱉中清溪烏鱉品系和日本品系的鑒定方法，從而為改善烏質性狀育種提供依據(jù)。

本發(fā)明的技術方案為：基于ASP基因表達量差異鑒定清溪烏鱉品系和日本品系的方法，該方法通過對待鑒定中華鱉腹部皮膚ASP基因的表達量進行檢測，若ASP基因相對表達量值≥0.04，則確定為日本品系，若ASP基因相對表達量值＜0.04，則確定為清溪烏鱉品系。

進一步地，鑒定方法為：提取待鑒定中華鱉腹部皮膚組織RNA進行反轉錄，得到cDNA，然后以cDNA為模板進行qRT-PCR擴增，以GAPDH基因作為內參，其中ASP基因擴增的引物對為：ASP-F：5′-TCTCTGCTGCATTTTGCTTTCA-3′，ASP-R：5′-AGATGGGTGGAAGATCTGGGA-3′；GAPDH基因擴增的引物對為：GAPDH-F：5′-CCTGGTATGACAATGAGTT-3′，GAPDH-R：5′-GTGCCTGGTTTATTCCTT-3′；ASP基因相對于GAPDH基因的表達水平計算使用2^-ΔCt，當ASP基因相對表達量值≥0.04可確定為日本品系，當ASP基因相對表達量值在0.04以下的為清溪烏鱉品系。

進一步地，qRT-PCR擴增的條件為：

反應體系：6.25μL SYBR預混染料、1μL cDNA模板、0.25μL各引物對、4.25μLddH₂O，總體積為12μL；

擴增參數(shù)：95℃30s預變性，95℃15s變性、55℃30s退火、72℃30s延伸，40個循環(huán)后從65℃升溫到95℃獲得溶解曲線。