[發明專利]基于ASP基因表達量差異鑒定清溪烏鱉品系和日本品系的方法

在審

• 申請號: 201911078482.1
• 申請日: 2019-11-06
• 公開（公告）號: CN110878360A
• 公開（公告）日: 2020-03-13
• 發明（設計）人: 斯越秀;尹尚軍;張麗麗;錢國英
• 申請（專利權）人: 浙江萬里學院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851
• 代理公司: 成都方圓聿聯專利代理事務所(普通合伙) 51241
• 代理人: 李鵬

1.基于ASP基因表達量差異鑒定清溪烏鱉品系和日本品系的方法，其特征在于，該鑒定方法通過對待鑒定中華鱉腹部皮膚ASP基因的表達量進行檢測，若ASP基因相對表達量值≥0.04，則確定為日本品系，若ASP基因相對表達量值＜0.04，則確定為清溪烏鱉品系。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，提取待鑒定中華鱉腹部皮膚組織RNA進行反轉錄，得到cDNA，然后以cDNA為模板進行qRT-PCR擴增，以GAPDH基因作為內參，其中ASP基因擴增的引物序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；GAPDH基因擴增的引物序列如SEQID No.3和SEQ ID No.4所示；ASP基因相對于GAPDH基因的表達水平計算使用2^-ΔCt，當ASP基因相對表達量值≥0.04可確定為日本品系，當ASP基因相對表達量值在0.04以下的為清溪烏鱉品系。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，qRT-PCR擴增的條件為：

反應體系：6.25μL SYBR預混染料、1μL cDNA模板、0.25μL各引物對、4.25μL ddH₂O，總體積為12μL；

擴增參數：95℃30s預變性，95℃15s變性、55℃30s退火、72℃30s延伸，40個循環后從65℃升溫到95℃獲得溶解曲線。