[發(fā)明專利]基于復(fù)合菌種結(jié)合胰蛋白酶的菌酶協(xié)同作用固態(tài)發(fā)酵劑

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911077441.0
• 申請(qǐng)日: 2019-11-06
• 公開（公告）號(hào): CN110777094A
• 公開（公告）日: 2020-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡楊;趙鈺;尤娟;蔡曉雯;胡筱波;叢林;李金玲;劉茹;熊善柏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N9/50;A23L17/00;A23L29/00;A23L27/10;C12R1/25;C12R1/01
• 代理公司: 11401 北京金智普華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 楊采良

1.一種基于復(fù)合菌種結(jié)合胰蛋白酶的菌酶協(xié)同作用固態(tài)發(fā)酵劑，其特征在于，所述基于復(fù)合菌種結(jié)合胰蛋白酶的菌酶協(xié)同作用固態(tài)發(fā)酵劑由菌酶母液、填充料、保護(hù)劑組成；按質(zhì)量計(jì)，填充料為菌酶母液質(zhì)量的5～15％、保護(hù)劑為菌酶母液質(zhì)量的5～20％；

所述菌酶母液由植物乳桿菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌及胰凝乳蛋白酶組成；所述植物乳桿菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌菌體活菌數(shù)10⁶～10⁹cfu/mL；所述植物乳桿菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌分別培養(yǎng)至11～15h、7～12h、5～16h后6000rpm進(jìn)行冷凍離心濃縮；按按菌泥體積比植物乳桿菌：乳酸片球菌：戊糖片球菌為100：(10～100)：(10～100)；所述胰蛋白酶的添加量為0.5～3.5mL/100g魚肉，所述胰蛋白酶含量為10000～20000U/mL；

所述填充料為噴霧干燥填充料、真空冷凍干燥填充料、微波干燥填充料中的一種；所述噴霧干燥填充料，按質(zhì)量比由2～6％的可溶性淀粉、2～6％的脫脂奶粉組成；真空冷凍干燥填充料按質(zhì)量比由5％～10％的預(yù)糊化淀粉、2％～6％的脫脂奶粉組成；微波干燥填充料按質(zhì)量比由0.5％～2％淀粉和0.5％～2％麥芽糊精組成；

所述保護(hù)劑分別為噴霧干燥保護(hù)劑、真空冷凍干燥保護(hù)劑、微波干燥保護(hù)劑三者中的其中一種；所述噴霧干燥保護(hù)劑按質(zhì)量比由1～5％甘油、4～8％蔗糖、1～5％明膠組成；真空冷凍干燥保護(hù)劑按質(zhì)量比由1～3％膠原小肽、4～8％海藻糖、1～4％β-環(huán)糊精組成；微波干燥保護(hù)劑按質(zhì)量比由0.5～2％蔗糖、0.1～1％甘油、0.5～2％脫脂乳和0.5％～2％海藻酸鈉組成。

2.一種如權(quán)利要求1所述基于復(fù)合菌種結(jié)合胰蛋白酶的菌酶協(xié)同作用固態(tài)發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于，所述基于復(fù)合菌種結(jié)合胰蛋白酶的菌酶協(xié)同作用固態(tài)發(fā)酵劑的制備方法包括以下步驟：

步驟一，菌種的制備：植物乳桿菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌均采用MRS瓊脂培養(yǎng)基活化2次，30℃培養(yǎng)分別培養(yǎng)至48h；接種至200m L MRS液體培養(yǎng)基分別培養(yǎng)11～15h、7～12h、5～16h，使菌體活菌數(shù)均達(dá)到10⁶～10⁹cfu/mL；4℃6000rpm冷凍離心，菌體沉淀用無菌生理鹽水清洗兩次，重新懸浮于無菌生理鹽水，4℃冰箱保存，24h內(nèi)備用；

步驟二，菌酶母液的制備：步驟一得到的活菌數(shù)達(dá)到10⁶～10⁹cfu/mL的植物乳桿菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌在4℃6000rpm冷凍離心濃縮后，植物乳桿菌：乳酸片球菌：戊糖片球菌按菌泥體積比為100：(10～100)：(10～100)計(jì)，將菌泥混合，加入10000～20000U/mL胰蛋白酶液體；胰蛋白酶的添加量為0.5～3.5mL/100g魚肉，獲得菌酶母液；

步驟三，采用噴霧干燥、真空冷凍干燥或微波干燥中的一種進(jìn)行干燥。

3.如權(quán)利要求2所述基于復(fù)合菌種結(jié)合胰蛋白酶的菌酶協(xié)同作用固態(tài)發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于，所述步驟一菌種制備前需進(jìn)行菌種活化，具體包括：

(1)冷凍干燥管開管，用沾有70％酒精的棉花擦拭外管，在火焰上加熱外管的尖端，滴數(shù)滴無菌水于加熱處，使外管破裂，再敲破尖端，取出隔熱纖維紙和內(nèi)管，取出內(nèi)管的棉塞；

(2)無菌吸管，吸取0.3-0.5mL指定的液體培養(yǎng)基，滴入管內(nèi)并震蕩，直到均勻懸浮；

(3)取0.1-0.2mL的菌體懸浮液于指定平板培養(yǎng)基上，做劃線分離培養(yǎng)或做稀釋，用無菌L型玻璃棒均勻涂抹，檢驗(yàn)菌種的純度及活化情況；剩余菌體全部移入指定液體培養(yǎng)基內(nèi)，并依據(jù)指定溫度培養(yǎng)。