[發明專利]錦鯉ptps基因、編碼蛋白及應用

有效

• 申請號: 201911075817.4
• 申請日: 2019-11-06
• 公開（公告）號: CN110714017B
• 公開（公告）日: 2023-09-01
• 發明（設計）人: 田雪;李俊茹;董傳舉;王良炎;劉慧芬;吳利敏;宋飛彪;馬曉;王磊;張猛;李學軍
• 申請（專利權）人: 河南師范大學
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/68;G01N33/573;C12R1/19
• 代理公司: 新鄉市平原智匯知識產權代理事務所(普通合伙) 41139
• 代理人: 周闖

本發明公開了一種錦鯉ptps基因、編碼蛋白及其應用，屬于基因工程技術領域。本發明的技術方案要點為：錦鯉ptps基因，該錦鯉ptps基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示，還公開了含有上述錦鯉ptps基因的重組表達載體、重組菌株及其在制備鼠一抗檢測鯉科魚類PTPS蛋白中的應用。本發明首次克隆獲得錦鯉ptps基因，并將該基因構建表達載體和重組大腸桿菌菌株，利用重組大腸桿菌菌種在體外獲得大量表達的重組錦鯉PTPS蛋白，該重組錦鯉PTPS蛋白可用于鯉科魚類PTPS蛋白免疫組化、免疫印跡和Elisa檢測等相關領域。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種錦鯉ptps基因、編碼蛋白及其應用。

背景技術

體色是魚類的重要表型性狀之一，由色素細胞形成。魚類皮膚及鱗片中色素細胞的種類、數量和分布都會影響其體色。色素細胞由外胚層神經嵴細胞分化形成。在胚胎發育過程中，神經嵴細胞沿背腹軸分化成包括色素細胞在內的不同類型細胞。相對于哺乳動物只具有一種黑色素細胞，魚類具有六種色素細胞，包括黑色素細胞、紅色素細胞、黃色素細胞、虹彩細胞、藍色素細胞和白色素細胞。

黃色素細胞是僅次于黑色素細胞最受關注的研究對象。黃色素細胞可以合成紅/黃碟啶色素小體，在魚類體色形成中具有重要地位。碟啶是由嘧啶和吡嗪環組成的雜環復合物，根據結構可以分為蝶呤和黃素兩種類型。碟啶合成通路主要包含三個部分，第一部分從GTP合成BH4；第二部分是BH4的補充合成路徑；第三部分合成具有顏色的碟啶色素顆粒。Spr、PTPS(6-pyruvoyltetrahydropterin?synthase)和Gtpch(GTP?cyclohydrolase)是碟啶合成通路的關鍵酶，PTPS參與BH4的補救通路，也是BH4從頭合成途徑中的關鍵酶之一，同時也在蝶啶的生物合成中起關鍵作用。PTPS在孔雀魚、金魚的紅色素細胞和黃色素細胞中大量積累，并被證明與黃色素的合成具有不可或缺的作用。盡管PTPS在碟啶通路中具有重要作用，但PTPS在魚類體色中的研究集中在孔雀魚和金魚及青鳉和斑馬魚中，其它魚類中較少有報道。

錦鯉(Cyprinus?carpio?var.Koi)屬鯉科(Cyprinidae)、鯉屬(Cyprinus)，因體色鮮艷且多樣化深受人們喜愛，現人工培育的類型有100多種，具有重要的欣賞價值和經濟價值。目前為止，所有的錦鯉品系基本由雜交選育獲得。但經雜交選育的錦鯉性狀極不穩定，具有較高觀賞價值的錦鯉個體比例一般在0.01％-0.10％。通過克隆ptps?ORF序列，制備PTPS鼠多克隆抗體的功能，確定其在錦鯉黃色素和紅色素形成中的作用，有助于定向培養體色遺傳性狀穩定的錦鯉，也是錦鯉遺傳育種中亟待解決的問題。

發明內容

本發明的目的是提供了一種錦鯉ptps基因及含有該基因的重組表達載體、重組菌株和利用上述重組菌株制備重組錦鯉PTPS蛋白的方法及該重組錦鯉PTPS蛋白在制備鼠一抗檢測鯉科魚類PTPS蛋白中的應用。

本發明為實現上述目的采用如下技術方案，一種錦鯉ptps基因，其特征在于該錦鯉ptps基因的核苷酸序列如SEQ?IDNO:2所示。

本發明克隆了錦鯉的ptps基因并得到了3'UTR和部分5'UTR?？寺〉姆椒ㄊ浅Ｒ幍幕蚩寺》椒ǎ猛次锓N的基因比對設計簡并引物，經過PCR后得到中間片段，然后根據中間片段的序列分別設計兩個5'RACE的下游引物和兩個3'RACE的上游引物，再利用SMARTer?RACE?Kit中的通用引物UPM?long和UPM?short進行5'和3'嵌套PCR得到了ptps的ORF、5'UTR和3'UTR。最后設計克隆ORF的引物，PCR后把得到目的基因連接到pMD-19載體為pMD-19-ptps。