[發明專利]錦鯉ptps基因、編碼蛋白及應用

有效

• 申請號: 201911075817.4
• 申請日: 2019-11-06
• 公開（公告）號: CN110714017B
• 公開（公告）日: 2023-09-01
• 發明（設計）人: 田雪;李俊茹;董傳舉;王良炎;劉慧芬;吳利敏;宋飛彪;馬曉;王磊;張猛;李學軍
• 申請（專利權）人: 河南師范大學
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/68;G01N33/573;C12R1/19
• 代理公司: 新鄉市平原智匯知識產權代理事務所(普通合伙) 41139
• 代理人: 周闖

1.錦鯉ptps基因，其特征在于：該錦鯉ptps基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；該基因是通過基因克隆方法得到的，具體方法為：利用同源物種的基因比對設計簡并引物，經過PCR后得到中間片段，然后根據中間片段的序列分別設計兩個5?'RACE的下游引物和兩個3?'RACE的上游引物，再利用SMARTer?RACE?Kit中的通用引物UPM?long和UPM?short進行5'和3?'嵌套PCR得到了ptps?的ORF、5?'UTR和3?'UTR；最后設計克隆ORF的引物，PCR后把得到目的基因連接到pMD-19?載體為pMD-19-ptps；所述兩個5?'RACE的下游引物和兩個3?'RACE的上游引物的核苷酸序列分別如下所示：

5'RACE特異性引物為：

out：5'GGGCGGGAGAAGCTTCACCATACTC?3'；

in：5'CTCCGCCACCTCGTTCT3'；

3'RACE特異性引物分別為:

out：5'GCGCCTGCCATCGCTTACACAGCAA3'；

in：5'TGTGCCGTATTTTGCTGATGTCGT?3'。

2.權利要求1所述的錦鯉ptps基因編碼的錦鯉PTPS蛋白，其特征在于：該錦鯉PTPS蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

3.一種含有權利要求1所述的錦鯉ptps基因的重組表達載體，其特征在于：所述重組表達載體為含有編碼錦鯉PTPS蛋白基因的表達載體pET32a-ptps。

4.如權利要求3所述的錦鯉ptps基因的重組表達載體在制備重組錦鯉ptps基因蛋白的應用，其特征在于：所述重組錦鯉ptps基因蛋白制備過程為：將由含有編碼錦鯉PTPS蛋白基因的表達載體pET32a-ptps2轉化大腸桿菌BL21而得到的大腸桿菌重組菌株pET32a-ptps-BL21將重組菌株pET32a-ptps-BL21接種在LB液體培養基中，37℃，200轉/分培養至OD600達到0.4-0.6，再加入IPTG至終濃度為1mM，37℃，200轉/分培養6h后5000g離心10min收集菌體，超聲破碎后12000g離心10min收集上清，經分離純化得到重組錦鯉PTPS蛋白。

5.權利要求2所述的錦鯉PTPS蛋白在制備檢測鯉科魚類PTPS鼠一抗中的應用，用于檢測鯉科魚類PTPS蛋白免疫印跡和免疫組化及檢測和分析PTPS蛋白魚類組織中的表達和定位。