[發明專利]異常凝血酶原化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201911075093.3
• 申請日: 2019-11-06
• 公開（公告）號: CN110850085A
• 公開（公告）日: 2020-02-28
• 發明（設計）人: 王凱;孟令敏;韓美玉;張丹丹;高威;孫成艷;何浩會
• 申請（專利權）人: 迪瑞醫療科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產權代理有限公司 22214
• 代理人: 于曉慶

異常凝血酶原化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法，屬于體外檢測領域，該試劑盒包括：鏈霉親和素磁顆粒、化學發光標記物標記的異常凝血酶原單克隆抗體、偶聯標記物標記的異常凝血酶原單克隆抗體、化學發光激發液、異常凝血酶原校準品。鏈霉親和素磁顆粒中磁顆粒濃度0.01～1％，粒徑0.05～3μm。異常凝血酶原單克隆抗體與化學發光標記物的摩爾比為1:1～20。異常凝血酶原單克隆抗體與偶聯標記物的摩爾比為1:1～50。化學發光標記物為吖啶酯、魯米諾、異魯米諾或三聯吡啶釕。偶聯標記物為生物素。本發明靈敏度高，特異性強，準確性高，檢測時間短，操作方便。

技術領域

本發明屬于體外檢測技術領域，具體涉及一種異常凝血酶原化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

PIVKA-II是一種維生素K缺乏誘導蛋白，又被稱為異常凝血酶原，最初于1984年由Liebman從肝細胞癌患者的血清中發現，是肝細胞癌的產物，凝血酶原在維生素K充足情況下由肝臟合成，其主要有四個功能域：1個γ-羧基谷氨酸區(Gla區)，2個環狀(Kringlek區)和1個催化區。正常凝血酶原是在肝細胞微粒體內主要依賴維生素K的γ-谷氨酰羧化酶及輔酶VitaminK-epoxide-reductase和VitaminK-reductase參與下，將結構Gla區中的第6，7，14，16，19，20，25，26，29和32位的10個Glu殘基羧化為Gla，使之成為有活性的凝血酶原，上述任何位點的一個或多個Glu殘基羧化不全，都將可能形成PIVKA-II，從而失去與鈣離子和磷脂的結合能力，喪失凝血活性。

肝癌(HCC)因缺少早期的診斷指標，有50％的患者出現臨床癥狀時的檢驗結果都處于臨床晚期，5年存活率低于10％。乙肝病毒感染是肝癌發病的主要原因，HCC早期診斷的血清標志物一直是研究關注的熱點，甲胎蛋白AFP是HCC檢測最常用的標志物，其檢測敏感性僅為60％～70％，但約18％的肝癌AFP不升高，早期肝癌AFP的假陰性率高達40％，可能因為某些類型的肝癌早期并不表達AFP，或者AFP含量與腫瘤體積大小有關。此外，在篩選有慢性病毒性肝炎背景下的HCC時，AFP的特異性和敏感性相對較低，其假陰性和假陽性均影響HCC的正確診斷，而且AFP在一些良性肝病、部分生殖系統和胃腸道的惡性腫瘤患者的血清中也會升高，從而影響臨床診斷結果。臨床研究表明，PIVKA-II與多種HCC惡性增值途徑相關，其可能在HCC的發展、浸潤與轉移等方面促進肝細胞的惡性增值，AFP與PIVKA-II聯合診斷，可以將HCC診斷的敏感度和特異性提高8～20％。目前測定異常凝血酶原的方法有放射免疫分析法(RIA)、酶免疫分析法(EIA)、化學發光免疫法法(CLEIA)等。然而，EIA法尤其局限性，特異性差、靈敏度低、準確性不高等。放射性免疫方法雖然被認為是準確可靠的方法，但是放射性同位素的輻射影響，廢物處理需要專門的實驗室，成本高和半衰期短的弊端，已經使該方法逐漸遭到淘汰。

發明內容

目前市面上檢測異常凝血酶原常用的方法是酶免疫分析法和放射免疫分析法，由于兩種方法存在固有缺點即靈敏度低、特異性差、線性范圍窄以及抗干擾能力差導致測量結果不準確，而放射性免疫對實驗室的要求也造成了實驗成本高的問題，為了解決上述問題，本發明提供一種異常凝血酶原化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法，其采用鏈霉親和素磁珠-生物素標記抗體-吖啶酯標記抗體體系進行PIVKA-II的檢測，具有較高的靈敏度和特異性，準確性更高，檢測時間更短，操作更方便。

本發明為解決技術問題所采用的技術方案如下：

本發明的異常凝血酶原化學發光免疫檢測試劑盒，包括：鏈霉親和素磁顆粒、化學發光標記物標記的異常凝血酶原單克隆抗體、偶聯標記物標記的異常凝血酶原單克隆抗體。

作為優選的實施方式，所述鏈霉親和素磁顆粒中，磁顆粒的濃度為0.01～1％，磁顆粒的粒徑為0.05～3μm。

作為優選的實施方式，所述化學發光標記物標記的異常凝血酶原單克隆抗體中，異常凝血酶原單克隆抗體與化學發光標記物的摩爾比為1:1～20。