[發明專利]一種誘導牙髓牙本質組織再生的雙層復合支架制備方法

有效

• 申請號: 201911075077.4
• 申請日: 2019-11-06
• 公開（公告）號: CN110859991B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發明（設計）人: 董艷梅;黃桂彬;王賽楠
• 申請（專利權）人: 北京大學口腔醫學院
• 主分類號: A61L27/10
• 分類號: A61L27/10;A61L27/12;A61L27/22;A61L27/56
• 代理公司: 北京神州華茂知識產權有限公司 11358
• 代理人: 韓衛群

1.一種誘導牙髓牙本質組織再生的雙層復合支架制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)以植酸為前驅體合成的生物活性玻璃（PSC）的制備：PSC以植酸作為磷的前驅體，加入乙醇和水中混勻；在磁力攪拌下，加入正硅酸乙酯，四水硝酸鈣，繼續攪拌直至形成透明、均一的溶膠；10-35℃室溫下靜置10-50天形成濕凝膠；濕凝膠置于25-60℃烘箱中陳化2-7天，然后在70-120℃下再干燥1-2周，形成干凝膠；將干凝膠研磨后置入高溫爐400-700℃熱處理1-5小時，過篩后得到即為植酸制備的生物活性玻璃，即PSC；所得磷硅酸基玻璃中的P2O5的摩爾百分含量為0.5-68％，SiO2的摩爾百分含量為13.2-99％，CaO的摩爾百分含量為0.5-80％，顆粒大小為100-500微米；

(2)PSC的多肽改性：取PSC粉末，以無水甲苯作為分散劑，二者混合后超聲震蕩輔助分散，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，于氮氣保護下80℃加熱回流反應24h，離心，依次使用甲苯、無水乙醇、去離子水清洗，低溫凍干后制得PSC-NH2；多肽序列枝接：配置2-嗎啉乙磺酸緩沖液，調整pH至5.5，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、多肽序列、PSC-NH2，磁力攪拌下室溫反應24h，使用去離子水清洗，低溫凍干后制得多肽改性PSC顆粒；

(3)支架外層部分的制備:將步驟(2)的多肽改性PSC顆粒與水凝膠材料復合，水凝膠濃度為1-5mg/ml，多肽改性PSC顆粒與水凝膠的質量體積比范圍是0.5-5mg/ml，超聲震蕩混勻后注入模具中，得到錐形中空的外層支架，尖端外徑為0.6-1.0mm,內徑0.3-0.5mm,錐度0.04-0.06，長度10-15mm；真空冷凍干燥獲得外層支架；

(4)支架內層部分的制備：將濃度范圍為1-5mg/ml水凝膠材料注入步驟(3)中獲得的外層支架內，真空冷凍干燥；

(5)雙層支架的交聯完成：將步驟(4)中獲得的支架浸泡于0.1％-0.5％戊二醛交聯劑中，使內外層支架交聯形成具有雙層結構的復合支架；

所述支架內層結構能誘導根尖周來源的干細胞定向遷移，增強髓腔中央新生結締組織的血管化或神經化，促進牙髓樣軟組織的生成；支架外層結構能進一步誘導干細胞的成牙本質向定向分化，誘導牙本質樣硬組織的生成；這種利用雙層結構，誘導不同組織形態特點的牙體復合結構的再生的支架材料，是現有單一性狀材料無法實現的；

所述步驟5)獲得的支架上有若干個孔隙，孔隙大小為100-500微米。

2.根據權利要求1所述的一種誘導牙髓牙本質組織再生的雙層復合支架制備方法，其特征在于：所述步驟2)的多肽序列為RGDS多肽或轉化生長因子TGF-β結合多肽或肝素結合多肽。

3.根據權利要求1所述的一種誘導牙髓牙本質組織再生的雙層復合支架制備方法，其特征在于：所述步驟3)的水凝膠材料為明膠、膠原或殼聚糖。