[發明專利]多重PCR檢測人魚共患病病原菌的方法

有效

• 申請號: 201911074865.1
• 申請日: 2019-11-06
• 公開（公告）號: CN110724752B
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發明（設計）人: 夏洪麗;魯義善;程俊;夏立群;喻大鵬;陳文捷;龍夢;樊慧敏
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學深圳研究院;深圳義海生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12R1/63;C12R1/01;C12R1/46
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理有限公司 11562
• 代理人: 杜權

本發明涉及一種PCR檢測人魚共患病病原菌的方法，包括：提取溶藻弧菌、類志賀毗鄰單胞菌、副溶血弧菌、無乳鏈球菌、霍亂弧菌、創傷弧菌的基因組DNA；對病原菌的基因組DNA進行引物設計；利用設計的引物和PCR方法同時對溶藻弧菌、類志賀毗鄰單胞菌、副溶血弧菌、無乳鏈球菌、霍亂弧菌、創傷弧菌的基因組DNA進行擴增和檢測。本發明的方法能夠同時檢測多種病原菌，且特異性和靈敏度高。

技術領域

本發明涉及基因檢測領域，更具體地，涉及多重PCR檢測人魚共患病病原菌的方法。

背景技術

人魚共患病指水生動物和人類之間自然傳染的疾病。傳染源包括魚、蝦、蟹等。這類疾病已成為當今世界上最關注的公共衛生問題之一。根據國家中長期科學和技術發展規劃綱要(2006-2020年)，畜禽水產健康養殖與疫病防控是產業科學發展的重要主題。隨著人民生活水平的不斷提高，我國水產品的市場供應日趨完善，消費量不斷上升。尤其是我國各地居民普遍有進食生鮮食品的習慣，例如生魚片、生蠔、生蝦等。人魚共患病病原主要的傳播方式有兩種：穿刺、擦傷或者皮膚潰瘍引起的傷口接觸性感染或進食生鮮導致的食源性感染，弧菌感染魚后可能導致厭食、潰瘍等癥狀，人通過攝食或者創傷接觸感染的水產品，可能會感染創傷弧菌、副溶血弧菌、哈維氏弧菌等而引發疾病，如若發病早期未得到及時正確的診斷死亡率極高。鏈球菌也是人魚共患疾病的主要病原菌，臨床癥狀表現為腹脹、心內膜炎和腦膜炎等。傷口接觸水產品引起的鏈球菌感染致病的案例在加拿大、美國和新加坡等地都有相關的報道，其中85％的接觸性感染發生在亞洲。其它人魚共患病原菌還包括諾類志賀毗鄰單胞菌、霍亂弧菌、溶藻弧菌等，均對食品安全及國民健康構成了嚴重威脅。

病原菌的檢測經歷了從傳統培養法、免疫學檢測方法和分子生物學檢測的發展歷程。但是目前的檢測方法尚不能完全令人滿意，仍存在改進空間。

發明內容

為彌補現有技術的不足，解決現有技術中病原菌檢測周期長、一次性檢測種類少的問題，本發明提供了一種同時檢測六種人魚共患病病原菌的引物組和方法?？梢酝瑫r檢測溶藻弧菌、類志賀毗鄰單胞菌、副溶血弧菌、無乳鏈球菌、霍亂弧菌、創傷弧菌六種人魚共患病病原菌。針對以上病原菌的特性，設計了6對特異性引物，利用普通的PCR儀即可完成檢測。通過瓊脂糖電泳即可判斷樣品中是否含有上述六種病原菌。整個過程操作簡單，特異性強，檢測成本低。

本發明提供了一種PCR檢測人魚共患病病原菌的方法，包括：

提取溶藻弧菌、類志賀毗鄰單胞菌、副溶血弧菌、無乳鏈球菌、霍亂弧菌、創傷弧菌的基因組DNA；

對病原菌的基因組DNA進行引物設計，引物如下：

溶藻弧菌上游引物，核苷酸序列如SED ID NO.1所示，

溶藻弧菌下游引物，核苷酸序列如SED ID NO.2所示，

類志賀毗鄰單胞菌上游引物，核苷酸序列如SED ID NO.3所示，

類志賀毗鄰單胞菌下游引物，核苷酸序列如SED ID NO.4所示，

副溶血弧菌上游引物，核苷酸序列如SED ID NO.5所示，

副溶血弧菌下游引物，核苷酸序列如SED ID NO.6所示，

無乳鏈球菌上游引物，核苷酸序列如SED ID NO.7所示，

無乳鏈球菌下游引物，核苷酸序列如SED ID NO.8所示，

霍亂弧菌上游引物，核苷酸序列如SED ID NO.9所示，

霍亂弧菌下游引物，核苷酸序列如SED ID NO.10所示，

創傷弧菌上游引物，核苷酸序列如SED ID NO.11所示，

創傷弧菌下游引物，核苷酸序列如SED ID NO.12所示；