[發明專利]一種刺激響應的靶向聚多糖超分子診療組裝體及其制備方法

在審

• 申請號: 201911073997.2
• 申請日: 2019-11-06
• 公開（公告）號: CN110732027A
• 公開（公告）日: 2020-01-31
• 發明（設計）人: 張玉輝;郭澤宇;王杰;盛顯良;王李娟;宋明瑞;王博
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: A61K47/61
• 分類號: A61K47/61;A61K47/54;A61K31/4745;A61K49/00;A61P35/00;C08G81/00;C08B37/08
• 代理公司: 12223 天津耀達律師事務所
• 代理人: 侯力

1.一種刺激響應的靶向聚多糖超分子診療組裝體，其構筑單元為環糊精修飾透明質酸和二硫鍵連接的金剛烷萘酰亞胺喜樹堿前藥，通過環糊精和金剛烷之間的主客體相互作用構筑形成以親水的透明質酸為外殼、疏水的喜樹堿為內核的組裝體，組裝體形貌為球形的納米粒子，粒徑為260-280nm，并對硫醇具有很好的藥物釋放響應性；其中環糊精修飾透明質酸分子式為(C₁₄H₂₁NO₁₁)₁₁₇₅(C₅₈H₉₅N₃O₄₄)₁₉₆，平均每7個透明質酸單元修飾有一個環糊精單元，二硫鍵連接的金剛烷萘酰亞胺喜樹堿前藥的分子式為C₄₄H₅₂Cl₂N₄O₇S₂，該組裝體構筑單元的結構如下：

2.一種權利要求1所述刺激響應的靶向聚多糖超分子診療組裝體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)將分子量為550kDa的透明質酸鈉溶于pH為7.2，濃度1mM的磷酸緩沖溶液中，再加入1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基硫代琥珀酰亞胺，攪拌反應30min，得到溶液A；

2)將6-去氧-6-乙二胺-β-環糊精溶于pH為7.2，濃度1mM的磷酸緩沖溶液中，加入到步驟1)得到的溶液A中，在室溫下攪拌24h，然后裝入截留分子量范圍為8-14kDa的透析袋中用過量的蒸餾水連續透析5天，將所得溶液凍干制得環糊精修飾透明質酸(HACD)；

3)將4-硝基-N-2-氨乙基-1,8-萘酰亞胺溶于無水二氯甲烷中，向溶液中加入三乙醇胺，在冰浴條件下攪拌30min得到混合液B；將金剛烷甲酰氯溶于二氯甲烷中，然后逐滴加入到上述混合溶液B中，反應液在室溫下攪拌12h；將反應液用水萃取，收集有機相并用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾除去溶劑得金剛烷修飾萘酰亞胺中間體1的粗品，然后以正己烷與乙酸乙酯的混合液為展開劑，用200-300目硅膠柱進行分離制得金剛烷修飾萘酰亞胺中間體1；

4)將步驟3)制備的金剛烷修飾萘酰亞胺中間體1溶于乙醇中，加入催化量的鈀碳，加入水合肼，反應液回流攪拌12h；將反應液冷卻到室溫，過濾除去鈀碳，收集濾液，減壓蒸餾除去溶劑得金剛烷修飾萘酰亞胺中間體2的粗品，然后以正己烷與乙酸乙酯的混合液為展開劑，用200-300目硅膠柱進行分離制得金剛烷修飾萘酰亞胺中間體2；

5)將步驟4)制備的金剛烷修飾萘酰亞胺中間體2、N,N-二異丙基乙胺溶于無水甲苯中，將溶液逐滴加入到溶有三光氣的甲苯溶液中；反應液在100mL反應瓶中回流反應3h，將溶液冷卻到室溫，然后減壓蒸餾除去溶劑；將雙(2-羥乙基)二硫醚溶于四氫呋喃溶液中得溶液C，將溶液C加入到上述反應瓶中，反應液在室溫攪拌12h；減壓蒸餾除去溶劑，然后加入二氯甲烷和蒸餾水的混合液萃取；然后收集有機相，用無水硫酸鈉干燥；減壓蒸餾除去溶劑，以正己烷與乙酸乙酯的混合液為展開劑，用200-300目硅膠柱進行分離制得金剛烷修飾萘酰亞胺中間體3；

6)將喜樹堿和4-二甲氨基吡啶分散到無水二氯甲烷溶液中，然后向混合液中加入三光氣得混合液D，混合液D在室溫下攪拌30min；將步驟5)制備的金剛烷修飾萘酰亞胺中間體3溶于5mL二氯甲烷溶液中，逐滴加入到混合液D中，然后將反應液在室溫條件下攪拌12h，所得溶液用蒸餾水萃取，收集有機溶劑，用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾除去溶劑，以乙酸乙酯為展開劑，用200-300目硅膠柱進行分離制得二硫鍵連接的金剛烷萘酰亞胺喜樹堿前藥；

7)將步驟2)制得的環糊精修飾透明質酸溶于蒸餾水得到溶液a，將溶液a稀釋20倍得到溶液c，將步驟6)得到的二硫鍵連接的金剛烷萘酰亞胺喜樹堿前藥溶于二甲基亞砜中得到溶液b，然后將溶液c和溶液b混合均勻，制得刺激響應的靶向聚多糖超分子診療組裝體。

3.根據權利要求2所述刺激響應的靶向聚多糖超分子診療組裝體的制備方法，其特征在于：所述步驟1)中透明質酸鈉與磷酸緩沖溶液的用量比為0.006mmol/L，透明質酸鈉、1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基硫代琥珀酰亞胺的摩爾比為0.00018:0.875:0.875。