[發明專利]一種細胞膜長時間多色熒光成像試劑及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201911073732.2
• 申請日: 2019-11-06
• 公開（公告）號: CN110836879B
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 吳富根;許可飛;賈浩然
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C09K11/06;C08G81/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 楊曉莉

1.一種細胞膜長時間多色熒光成像試劑，其特征在于，該成像試劑是通過在聚酰胺-胺型樹枝狀高分子PAMAM的表面共價修飾聚乙二醇-膽固醇分子和熒光染料分子獲得。

2.根據權利要求1所述的細胞膜長時間多色熒光成像試劑，其特征在于，所述聚酰胺-胺型樹枝狀高分子PAMAM的世代數為第三代、第四代和第五代。

3.根據權利要求1所述的細胞膜長時間多色熒光成像試劑，其特征在于，所述聚乙二醇-膽固醇分子中聚乙二醇的分子量為500-10000。

4.根據權利要求1所述的細胞膜長時間多色熒光成像試劑，其特征在于，所述聚乙二醇-膽固醇分子的修飾密度為PAMAM末端氨基數量的10％-80％。

5.根據權利要求1所述的細胞膜長時間多色熒光成像試劑，其特征在于，所述的熒光染料分子為四甲基異硫氰酸羅丹明TRITC或吲哚菁類染料。

6.權利要求1所述細胞膜長時間多色熒光成像試劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)稱取N-羥基琥珀酰亞胺酯-聚乙二醇-膽固醇和聚酰胺-胺型樹枝狀高分子PAMAM，分別溶解于二甲基亞砜，溶解后混合，室溫下反應，反應結束后純化，冷凍干燥后即可制得成像試劑前體；

(2)將第(1)步制得的成像試劑前體溶于磷酸緩沖液中，并迅速與N-羥基琥珀酰亞胺酯-吲哚菁染料分子混合，室溫下反應，反應結束后純化，冷凍干燥后即可制得基于吲哚菁染料的細胞膜長時間多色熒光成像試劑；

或，將第(1)步制得的成像試劑前體溶于碳酸鈉/碳酸氫鈉緩沖液中，并與TRITC混合，室溫下反應，反應結束后純化，冷凍干燥后即可制得基于TRITC的細胞膜長時間多色熒光成像試劑。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，反應時間為4h以上，純化方法為：用截留分子量為1000-10000的透析袋先在二甲基亞砜透析液中對反應后的溶液進行透析純化24h以上，之后將透析液替換成超純水繼續透析純化24h以上。

8.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，磷酸緩沖液為pH＝6.8-8.0的磷酸緩沖液，反應時間為4h以上，純化方法為：用截留分子量為1000-10000的透析袋在超純水中對反應后的溶液進行純化。

9.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，碳酸鈉/碳酸氫鈉緩沖液為pH＝8.5-10.5的碳酸鈉/碳酸氫鈉緩沖液，反應時間為4h以上，純化方法為：用截留分子量為1000-10000的透析袋在超純水中對反應后的溶液進行純化。

10.權利要求1所述細胞膜長時間多色熒光成像試劑在細胞膜成像中的應用。