[發(fā)明專利]基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒及其制備使用方法

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• 申請日: 2019-11-05
• 公開（公告）號: CN110716057A
• 公開（公告）日: 2020-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 芮雙印;任傳伍
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽大千生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/557;G01N33/543
• 代理公司: 34148 合肥興東知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 王偉

本發(fā)明公開了一種基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒，包括反應(yīng)緩沖液R1和膠乳試劑R2；反應(yīng)緩沖液R1包括緩沖液、無機鹽、增濁劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑；膠乳試劑R2包括至少兩種通過HBP單抗與膠乳微球偶聯(lián)而成的膠乳試劑組成液，每種組成液分別包括膠乳保存液以及保存在膠乳保存液中的相應(yīng)HBP單抗標(biāo)記的膠乳微球；其中，每種組成液之間的混合比例為1:1。本發(fā)明還公開了一種上述基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒的制備使用方法。本發(fā)明可在全自動生化分析儀上使用，操作簡單、成本低廉，且自動化高、節(jié)省檢測時間；并且，在高穩(wěn)定性和高精密度情況下，相比他類產(chǎn)品，本發(fā)明具有更高的靈敏度和特異性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測試劑制備領(lǐng)域，尤其涉及一種基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒及其制備使用方法。

背景技術(shù)

肝素結(jié)合蛋白(heparin-binding protein，HBP)是中性粒細(xì)胞來源的顆粒蛋白，其結(jié)構(gòu)包含222個氨基酸的單鏈蛋白，含有8個半胱氨酸殘基，在第100、114或145位天冬氨酸殘基上具有糖基化位點，其結(jié)構(gòu)類似于中性粒細(xì)胞彈性蛋白，與其同源性為45％。

HBP主要是由PMN受外界刺激所釋放，所以正常人血中HBP含量很低，一般不超過10ng/mL；當(dāng)有感染發(fā)生時，部分細(xì)菌侵入到血管內(nèi)，菌體本身或者細(xì)菌釋放的毒素等物質(zhì)刺激中細(xì)粒細(xì)包釋放HBP，從而導(dǎo)致血中HBP含量升高。HBP在一般感染時能達(dá)到20-30ng/mL，ICU中嚴(yán)重感染會更高，可能超過100ng/mL。HBP在臨床上的具體應(yīng)用如下：

1)HBP作為局部感染的診斷指標(biāo)：當(dāng)腦脊液HBP水平超過20ng/mL時，診斷急性細(xì)菌性腦膜炎可以達(dá)到100％的敏感性、99.2％的特異性、96.2％的陽性預(yù)測值與100％的陰性預(yù)測值。因此，腦脊液中HBP水平可以提高區(qū)分細(xì)菌性和病毒性神經(jīng)系統(tǒng)感染的準(zhǔn)確性。

2)HBP輔助診斷尿道感染：U-HBP作為判斷尿路感染的敏感性和特異性分別是93.3％和90.3％，同時陰性預(yù)測值也達(dá)到98.3％，但U-HBP的陽性預(yù)測值不太理想，只能達(dá)到70％，與亞硝酸鹽結(jié)合起來將是一個很好的生化指標(biāo)。

3)HBP對感染性休克發(fā)生的預(yù)測：對比健康人(對照組)和沒有伴休克的患者(包括尿路感染、肺炎、腸胃炎等局部感染但沒有伴休克的患者)的血清中HBP水平，發(fā)現(xiàn)組間HBP水平并沒有顯著差異，而患有非膿毒性休克和膿毒性休克患者之間血清HBP水平卻有顯著差異；因此，發(fā)生感染的病人血中HBP水平不一定顯著升高，但發(fā)生休克的病人HBP水平一定會顯著升高，造成這一現(xiàn)象發(fā)生的原因與HBP改變血管通透性密不可分。

4)HBP對敗血癥中循環(huán)衰竭的預(yù)測：對伴休克的嚴(yán)重敗血癥、未伴休克的嚴(yán)重敗血癥、敗血癥、感染但未伴全身炎癥反應(yīng)綜合征、全身炎癥反應(yīng)綜合征但未發(fā)生感染這5組血液中HBP、PCT、IL-6、CRP水平以及WBC研究發(fā)現(xiàn)，伴休克的嚴(yán)重敗血癥病人的HBP水平顯著高于未伴休克的嚴(yán)重敗血癥病人，同時這兩組病人HBP水平顯著高于其他三組病人。目前，臨床上將HBP作為嚴(yán)重敗血癥的標(biāo)志，其敏感性、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別可以達(dá)到87.1％、95.1％、88.4％以及94.5％。

5)近期有研究發(fā)現(xiàn)肝素結(jié)合蛋白可以作為新興的診斷嚴(yán)重膿毒血癥及膿毒血癥性休克的早期生物標(biāo)志物，可以對嚴(yán)重感染患者即將發(fā)生的休克進(jìn)行預(yù)測。血液中PCT、HBP和血乳酸水平與膿毒癥患者病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，通過聯(lián)合檢測PCT、HBP和血乳酸能夠提高膿毒癥診斷效能，并且能夠用來鑒別不同病原菌感染所致的膿毒癥，對膿毒癥患者早期確診和病情評估有重要意義。