[發明專利]基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒及其制備使用方法

在審

• 申請號: 201911069850.6
• 申請日: 2019-11-05
• 公開（公告）號: CN110716057A
• 公開（公告）日: 2020-01-21
• 發明（設計）人: 芮雙印;任傳伍
• 申請（專利權）人: 安徽大千生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/557;G01N33/543
• 代理公司: 34148 合肥興東知識產權代理有限公司
• 代理人: 王偉

1.一種基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒，其特征在于，包括反應緩沖液R1和膠乳試劑R2；

所述反應緩沖液R1包括的成分及相應含量為：緩沖液0.5-5g/L，無機鹽10-25g/L，增濁劑15-40g/L，防腐劑0.5-2mL/L，穩定劑25-50g/L，表面活性劑0.5-4mL/L，溶劑為純化水；

所述膠乳試劑R2包括至少兩種通過HBP單抗與膠乳微球偶聯而成的膠乳試劑組成液，每種膠乳試劑組成液分別包括膠乳保存液以及保存在所述膠乳保存液中、且終濃度為0.8-1.0m g/mL的相應HBP單抗標記的膠乳微球；所述膠乳保存液包括的成分及相應含量為：緩沖液5-20g/L，無機鹽4-15g/L，穩定劑20-90g/L，防腐劑0.2-1.0mL/L，表面活性劑1-5mL/L，溶劑為純化水；其中，在所述膠乳試劑R2中，每種通過HBP單抗與膠乳微球偶聯而成的膠乳試劑組成液之間的混合比例為1:1。

2.根據權利要求1所述的基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒，其特征在于，在所述反應緩沖液R1中：

所述緩沖液為三羥甲基氨基甲烷緩沖液、甘氨酸緩沖液、2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸緩沖液中的一種；

所述無機鹽為氯化鈉、氯化鎂、氯化鉀、氯化鋅、氯化鈣中的一種或多種；

所述增濁劑為聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000中的一種或多種；

所述防腐劑為Proclin300和硫柳汞中的一種或多種；

所述穩定劑為BSA和蔗糖中的一種；

所述表面活性劑為吐溫-20、吐溫-80、曲拉通X-100中的一種或多種。

3.根據權利要求1所述的基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒，其特征在于，所述反應緩沖液R1的pH為7.3-7.7。

4.根據權利要求1所述的基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒，其特征在于，在所述膠乳保存液中：

所述緩沖液為3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸緩沖液；

所述無機鹽為氯化鈉、氯化鎂、氯化鉀、氯化鋅、氯化鈣中的一種或多種；

所述穩定劑為BSA、蔗糖、甘露醇中一種或多種；

所述防腐劑為Proclin300和硫柳汞中一種或多種；

所述表面活性劑為吐溫-20，吐溫-80，曲拉通X-100中的一種或多種。

5.根據權利要求1所述的基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒，其特征在于，所述膠乳保存液的pH為7.4-7.7。

6.根據權利要求1所述的基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒，其特征在于，所述HBP單抗標記的膠乳微球中使用的膠乳微球直徑為100-300nm。

7.根據權利要求1-6任一所述的基于膠乳增強免疫比濁法測定HBP的試劑盒，其特征在于，所述膠乳試劑R2的制備方法為：

①取固含量為10％的膠乳微球，并加至清洗緩沖液中；離心、去上清后用活化緩沖液對膠乳微球沉淀物重懸超聲，并加入活化劑活化；再次離心，用偶聯緩沖液對膠乳微球沉淀物重懸超聲，制得活化膠乳微球；

②取至少兩種HBP單抗，各自與制得的活化膠乳微球按照特定比例混勻，并進行一定時間的偶聯，制取偶聯后的膠乳微球；其中，所述活化膠乳微球與各HBP單抗抗體的v/w比均分別為1:(5-6)，偶聯時間為2h；

③向上述偶聯后的膠乳微球中加入封閉緩沖液進行封閉；封閉結束后，再次離心、去上清，并加入膠乳保存液重懸超聲，制取各自的膠乳試劑組成液；然后，將制取的各膠乳試劑組成液混合，即得所需的膠乳試劑R2。