[發(fā)明專利]一種快速提取純化藍(lán)藻總RNA的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911068366.1
• 申請(qǐng)日: 2019-11-05
• 公開（公告）號(hào): CN110804610A
• 公開（公告）日: 2020-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于鑫;李曦;李晶晶;陳輝;葉成松
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院城市環(huán)境研究所;廈門大學(xué);福建省水利水電勘測設(shè)計(jì)研究院
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速提取純化藍(lán)藻總RNA的方法，其特征在于在柱式細(xì)菌提取RNA的方法基礎(chǔ)上，發(fā)明了兩步前處理和一步預(yù)純化的方法，實(shí)現(xiàn)了快速提取和純化藍(lán)藻總RNA。

2.權(quán)利要求書1所述的一種快速提取純化藍(lán)藻總RNA的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟：

第一步：準(zhǔn)備藻液：藻細(xì)胞濃度 （相當(dāng)于葉綠素a=10-50 μg/L），合適的藻細(xì)胞濃度有利于RNA的抽提純化，也是該技術(shù)方法成敗的關(guān)鍵；（低濃度的藻細(xì)胞密度會(huì)導(dǎo)致RNA提取濃度低，質(zhì)量差；高濃度的藻細(xì)胞密度會(huì)導(dǎo)致RNA提取效率和RNA純度低）

第二步：收集藻細(xì)胞：取5-15 mL的藻液至50 mL離心管，離心6000-8000 g，時(shí)間1-3min，去上清液；

第三步：清洗藻細(xì)胞：加入0.9 % Nacl 5-10ml，渦輪混勻10-30 s，懸浮藻細(xì)胞，再次離心6000-8000 g，時(shí)間1 -3min，去上清液；

第四步：前處理1：藻細(xì)胞樣品迅速轉(zhuǎn)移至液氮凍存1-3 min，取出藻細(xì)胞塊，液氮研磨3-5min，研磨至粉末狀；

第五步：前處理2：將全部藻粉轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管 （DEPC水處理，RNase-free），加入50-150μL 溶菌酶溶液（濃度：3-5 mg/L），渦輪混勻20-40 s；

第六步：預(yù)純化：向藍(lán)藻懸浮液中加入DNase（8-10 μL, 濃度 0.5-2 U/ul）和RNase 抑制劑（3-5 μL ，濃度20-60 U/ul）；

第七步：RNA抽提：利用柱式細(xì)菌總RNA抽提試劑盒對(duì)藻溶液樣品進(jìn)行RNA提取；

上述操作步驟中，所有的器皿均經(jīng)過殺滅RNA酶活性處理，使提取的RNA不被破壞。