[發明專利]一種供臨床使用的脫細胞角膜基質的制備方法

有效

• 申請號: 201911066843.0
• 申請日: 2019-11-04
• 公開（公告）號: CN110841111B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 王海利;張晉南;宇詠梅;唐小琪;馬百雙;甘良波
• 申請（專利權）人: 深圳艾尼爾角膜工程有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50
• 代理公司: 北京康盛知識產權代理有限公司 11331
• 代理人: 董娣

1.一種供臨床使用的脫細胞角膜基質的制備方法，包括：去除角膜上皮層之后削切得到預定厚度的板層角膜，其特征在于，還包括：

a)將削切后的角膜密封后置于液氮中冷凍；

b)將冷凍后的角膜置于水浴中解凍；

c)將解凍后的角膜放入脫細胞試劑中進行振蕩處理；

d)將振蕩處理后的角膜置于等滲液中進行超聲處理，以脫除細胞；

e)將脫細胞后的角膜放入軟化液中靜置，再放入水中振蕩處理；所述軟化液具有促進角膜膠原微觀結構恢復的作用，所述軟化液含有聚乙烯比咯烷酮；所述脫細胞試劑包含0.2-1.0%中性蛋白酶和0.01-0.20%EDTA。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟a)所述冷凍的時長為5-60min。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟b)所述水浴的溫度是20-37℃，所述角膜在水浴中的持續時長是10-30min。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c)所述振蕩處理是指：在4-45℃的脫細胞試劑中振蕩10-120min。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟d)所述等滲液為生理鹽水或/和PBS緩沖液；或者，步驟d)所述超聲的頻率為10-100kHz，超聲持續時長為8-15min。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，交替重復步驟a)和步驟b)1-5次，或者，交替重復步驟c)和步驟d)1-8次。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述軟化液含有透明質酸、L-天冬氨酸中的一種或兩種。

8.根據權利要求7所述的脫細胞方法，其特征在于：步驟e)所述軟化液的溫度為2-37℃，步驟e)所述靜置的持續時長為10-60min，步驟e)所述振蕩處理的持續時長為1-10min。