[發(fā)明專利]一種腦腫瘤實體瘤原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911065992.5
• 申請日: 2019-11-04
• 公開（公告）號: CN112760286B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 尹申意;張函槊
• 申請（專利權(quán)）人: 北京基石生命科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 張立娜

本發(fā)明公開了一種腦腫瘤實體瘤原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法。本發(fā)明提供了腦腫瘤實體瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)方法及配套試劑，該技術(shù)核心是：用溫和細(xì)胞解離試劑處理腦腫瘤實體瘤組織，最大程度保證了組織中腫瘤細(xì)胞活力；配制特殊無血清培養(yǎng)基，利用懸浮培養(yǎng)體系對腦腫瘤來源的實體瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，保證腫瘤細(xì)胞正常擴(kuò)增的同時最大限度的排除正常細(xì)胞的干擾。利用本發(fā)明方法得到的腦腫瘤實體瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)物可用于多種細(xì)胞水平體外實驗、二代測序、構(gòu)建動物模型、構(gòu)建細(xì)胞系等等?？深A(yù)見，這種培養(yǎng)方法在腦腫瘤的研究和臨床診斷治療領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種腦腫瘤實體瘤原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

腦部腫瘤是指生長在顱腔的新生物，又稱顱內(nèi)腫瘤、腦癌，可起源于腦、腦膜、神經(jīng)、血管及腦附件，或由身體的其他組織或臟器轉(zhuǎn)移侵入顱內(nèi)而形成，大都可產(chǎn)生頭痛、顱內(nèi)高壓及局灶性癥狀。腦瘤的發(fā)生率約為1.9-5.4人/(年·10萬人)，占全身各種腫瘤的5％。腦膠質(zhì)瘤是最常見的腦腫瘤，占腦部腫瘤發(fā)病率的約60％，其中膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(WHO4級)患者的中位生存期僅14.6～17個月，5年生存率不足10％。

盡管世界各國的科研和醫(yī)療機(jī)構(gòu)對腦腫瘤的病因以及發(fā)生發(fā)展過程的研究都有很大力度的投入，但是人類對這種疾病仍然知之甚少。腦腫瘤是一類復(fù)雜疾病，其發(fā)生、發(fā)展是一個動態(tài)的過程，涉及到諸多信號分子相互作用，形成了一個復(fù)雜的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，同時還受到外界環(huán)境因素的影響。腦腫瘤的病因和發(fā)生發(fā)展過程有很強(qiáng)的個體差異性，不能一概而論。并且部分類型的腦腫瘤缺乏可用于基礎(chǔ)科研和藥物開發(fā)的細(xì)胞系，極大地制約了腦腫瘤新型診療研發(fā)的進(jìn)展。因此將腦腫瘤實體瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)物作為模型進(jìn)行個體化精準(zhǔn)研究是腦腫瘤研究領(lǐng)域乃至腦腫瘤診斷治療領(lǐng)域的趨勢。

現(xiàn)有的原代腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)主要有2D培養(yǎng)，3D培養(yǎng)，重編程培養(yǎng)等幾類，這些方法都不同程度的面臨培養(yǎng)周期極長，培養(yǎng)成功率低，雜細(xì)胞難以去除等問題。

發(fā)明內(nèi)容

為了有效解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種新的腦腫瘤實體瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及配套試劑，該技術(shù)的核心是：(1)用溫和細(xì)胞解離試劑處理腦腫瘤實體瘤組織，最大程度的保證了組織中腫瘤細(xì)胞的活力；(2)配制特殊的無血清培養(yǎng)基，利用懸浮培養(yǎng)體系對腦腫瘤實體瘤來源的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，保證腫瘤細(xì)胞正常擴(kuò)增的同時最大限度的排除正常細(xì)胞的干擾。

第一方面，本發(fā)明要求保護(hù)一種培養(yǎng)腦腫瘤實體瘤原代細(xì)胞的方法。

本發(fā)明所要求保護(hù)的培養(yǎng)腦腫瘤實體瘤原代細(xì)胞的方法，可包括如下步驟：

利用腦腫瘤實體瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)腦腫瘤實體瘤原代細(xì)胞；