[發明專利]一種大腸桿菌活化發酵方法

在審

• 申請號: 201911065376.X
• 申請日: 2019-11-04
• 公開（公告）號: CN110804636A
• 公開（公告）日: 2020-02-18
• 發明（設計）人: 周麗;孫磊
• 申請（專利權）人: 寧波酶賽生物工程有限公司
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C12N1/20;C12R1/19
• 代理公司: 寧波高新區成舟遠東專利代理事務所(普通合伙) 33306
• 代理人: 楊新勇

本發明適用于微生物技術領域，提供了一種大腸桿菌活化發酵方法，包括：取出大腸桿菌接種于培養基上，得到一級平板；取單菌落繼續接種于培養基上，得到二級平板；取多個單菌落接種于液體培養基中，旋轉培養得到一級種子液；取一級種子液繼續接種于液體培養基中，旋轉培養得到二級種子液；取二級種子液接種于發酵底液中進行發酵，并采取溶氧反饋的方式進行補料；加入誘導培養基誘導蛋白表達，并采取恒pH補料進行補料繼續進行發酵。本發明實施例提供的大腸桿菌活化發酵方法，通過兩次平板培養以及兩次液體培養，得到二級種子液，能夠有效地實現菌種的復壯，有效提高了后續發酵過程的穩定性以及目標產物的表達量。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，尤其涉及一種大腸桿菌活化發酵方法。

背景技術

發酵工程是生物技術的重要組成部分，是生物技術產業化的重要環節。發酵技術有著悠久的歷史，作為現代科學概念的微生物發酵工業是在傳統發酵技術的基礎上，結合了現代的基因工程、細胞工程等的新技術，在發酵過程中常常伴隨著蛋白的表達。在微生物發酵過程中，菌種活化是保證發酵穩定的前提也影響著目標蛋白的表達，是至關重要的一個環節。

然而，現有的菌種活化文獻報道常采用的是菌種復壯后，斜面培養，接入搖瓶在搖床上培養一段時間后，再以一定接種量接入發酵罐進行發酵，但是這樣的活化過程還存在著發酵不穩定、目標產物表達量較低的情況。

可見，現有的菌種活化過程還存在著后續發酵不穩定、目標產物表達量低的技術問題。

發明內容

本發明實施例的目的在于提供大腸桿菌活化發酵方法，旨在解決現有的菌種活化過程還存在著后續發酵不穩定、目標產物表達量低的技術問題。

本發明實施例是這樣實現的，一種大腸桿菌活化發酵方法，包括以下步驟：

從凍存管取出大腸桿菌接種于第一培養基上，培養16~24小時后，得到一級平板；

在一級平板上取單菌落大腸桿菌接種于第二培養基上，培養16~24小時后，得到二級平板；

在二級平板上取多個單菌落大腸桿菌接種于第一液體培養基中，在25℃~37℃環境下旋轉培養6~10小時，得到一級種子液；

取一級種子液接種于第二液體培養基中，在25℃~37℃環境下旋轉培養12~20小時，得到二級種子液；

取二級種子液接種于發酵底液中進行發酵，并采取溶氧反饋的方式加入發酵補料進行補料；

發酵9~10小時后，加入誘導培養基誘導蛋白表達，并繼續發酵，發酵過程中采取恒pH補料的方式加入發酵補料進行補料。

本發明實施例提供的大腸桿菌活化發酵方法，在從凍存管取出大腸桿菌接種于第一平板培養基上，培養16~24小時后，再從第一平板培養基上取單菌落大腸桿菌繼續接種于第二培養基，培養16~24小時，得到二級平板，再在二級平板上取多個單菌落大腸桿菌接種于第一液體培養基中，旋轉培養6~10小時，得到一級種子液，再取一級種子液接種于第二液體培養基中，旋轉培養12~20小時，得到二級種子液，最終將二級種子液接種于發酵底液進行發酵，以溶氧反饋的方式加入發酵補料進行補料，再加入誘導培養基誘導蛋白表達，并持續發酵。本發明實施例提供的大腸桿菌活化發酵方法，通過兩次平板培養以及兩次液體培養，得到二級種子液，能夠有效地實現菌種的復壯，有效提高了后續發酵過程的穩定性以及目標產物的表達量。

附圖說明

圖1為本發明提供的實施例3以及對比例1的發酵結果的蛋白質電泳結果圖。

具體實施方式