[發明專利]一種大腸桿菌活化發酵方法在審
| 申請號： | 201911065376.X | 申請日： | 2019-11-04 |
| 公開（公告）號： | CN110804636A | 公開（公告）日： | 2020-02-18 |
| 發明（設計）人： | 周麗;孫磊 | 申請（專利權）人： | 寧波酶賽生物工程有限公司 |
| 主分類號： | C12P21/00 | 分類號： | C12P21/00;C12N1/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 寧波高新區成舟遠東專利代理事務所(普通合伙) 33306 | 代理人： | 楊新勇 |
| 地址： | 315042 浙江省寧波市世紀大道北段33*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 大腸桿菌 活化 發酵 方法 | ||
1.一種大腸桿菌活化發酵方法，其特征在于，包括以下步驟：
從凍存管取出大腸桿菌接種于第一培養基上，培養16~24小時后，得到一級平板；
在一級平板上取單菌落大腸桿菌接種于第二培養基上，培養16~24小時后，得到二級平板；
在二級平板上取多個單菌落大腸桿菌接種于第一液體培養基中，在25℃~37℃環境下旋轉培養6~10小時，得到一級種子液；
取一級種子液接種于第二液體培養基中，在25℃~37℃環境下旋轉培養12~20小時，得到二級種子液；
取二級種子液接種于發酵底液中進行發酵，并采取溶氧反饋的方式加入發酵補料進行補料；
發酵9~10小時后，加入誘導培養基誘導蛋白表達，并繼續發酵，發酵過程中采取恒pH補料的方式加入發酵補料進行補料。
2.根據權利要求1所述的大腸桿菌活化發酵方法，其特征在于，所述大腸桿菌選用大腸桿菌BL21（DE3）菌株。
3.根據權利要求1所述的大腸桿菌活化發酵方法，其特征在于，所述第一培養基以及第二培養基為LB平板培養基。
4.根據權利要求1所述的大腸桿菌活化方法，其特征在于，所述第一液體培養基以及第二液體培養基為LB液體培養基或TB液體培養基或2×YT液體培養基中的一種。
5.根據權利要求1所述的大腸桿菌活化發酵方法，其特征在于，在所述旋轉培養的過程中，轉速控制在200轉~300轉每分鐘。
6.根據權利要求1所述的大腸桿菌活化發酵方法，其特征在于，每1升所述發酵底液中包含0.85~0.90克硫酸銨、0.95~1.00克二水檸檬酸三鈉、12~13克三水磷酸氫二鉀、6.2~6.3克磷酸二氫鉀、3.3~3.4克酵母浸粉、0.08~0.09克檸檬酸鐵銨。
7.根據權利要求1所述的大腸桿菌活化發酵方法，其特征在于，每1升所述發酵補料中包含400~500克葡萄糖、10~15克氯化銨以及4~5克七水硫酸鎂。
8.根據權利要求1所述的大腸桿菌活化發酵方法，其特征在于，所述采取溶氧反饋的方式加入發酵補料進行補料的步驟中，當溶氧高于85%后，加入發酵補料進行補料。
9.根據權利要求1所述的大腸桿菌活化發酵方法，其特征在于，所述發酵過程中采取恒pH補料的方式加入發酵補料進行補料的步驟中，通過加入發酵補料控制pH穩定在6.8~7.2。
10.根據權利要求1所述的大腸桿菌活化發酵方法，其特征在于，所述誘導培養基選用濃度為400g/L的乳糖。
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