[發(fā)明專利]一種芋軟腐病菌接種方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911060273.4 | 申請日： | 2019-11-01 |
| 公開（公告）號： | CN110760560A | 公開（公告）日： | 2020-02-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 顏梅新;黃偉華 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 |
| 主分類號： | C12Q1/24 | 分類號： | C12Q1/24;C12R1/18 |
| 代理公司： | 45129 南寧智卓專利代理事務(wù)所(普通合伙) | 代理人： | 譚月萍;鄧世江 |
| 地址： | 530007 廣西*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 軟腐病菌 球莖 懸浮液 致病性 切片 培養(yǎng)皿 接種 農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域 測試周期 機理研究 技術(shù)支持 室溫保濕 相關(guān)基因 重要意義 組織表面 接種量 棉花團 突變體 移液器 保濕 菌株 皿蓋 吸水 篩選 測試 | ||
1.一種芋軟腐病菌接種方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：利用移液器吸取芋軟腐病菌懸浮液，滴至放置于培養(yǎng)皿的芋球莖切片組織表面，室溫保濕，蓋上皿蓋。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種芋軟腐病菌接種方法，其特征在于：所述芋軟腐病菌懸浮液包括芋軟腐病菌野生型菌株懸浮液和芋軟腐病菌突變體菌株懸浮液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種芋軟腐病菌接種方法，其特征在于：所述芋軟腐病菌野生型菌株懸浮液和芋軟腐病菌突變體菌株懸浮液的濃度均為1×107個/mL，接種量為10uL，可接種5-10個菌株每片芋切片組織。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種芋軟腐病菌接種方法，其特征在于：所述芋軟腐病菌野生型菌株懸浮液和芋軟腐病菌突變體菌株懸浮液的制備過程為：
將病標(biāo)樣腐爛組織經(jīng)無菌水懸浮后涂板于LB培養(yǎng)基中，于28℃培養(yǎng)2d；分離得到菌體，經(jīng)無菌水懸浮后，稀釋后涂板于LB培養(yǎng)基中，于28℃培養(yǎng)2d得到單菌落；將芋軟腐病菌在LB液體培養(yǎng)基中，于28℃搖床，200rpm，培養(yǎng)1d，獲得芋軟腐病菌野生型菌株懸浮液；將經(jīng)Tn5轉(zhuǎn)化獲得的芋軟腐病菌突變體菌株分別在LB液體培養(yǎng)基中，于28℃搖床，200rpm，培養(yǎng)1d，得到芋軟腐病菌突變體菌株懸浮液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種芋軟腐病菌接種方法，其特征在于：所述培養(yǎng)皿使用直徑15cm培養(yǎng)皿，采用吸水的棉花團置于直徑15cm培養(yǎng)皿中芋組織周圍保濕。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種芋軟腐病菌接種方法，其特征在于：所述芋球莖切片組織為長5-10cm、寬5-10cm、厚度1-2cm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種芋軟腐病菌接種方法，其特征在于：所述移液器為實驗室用移液器，量程為100uL。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種芋軟腐病菌接種方法，其特征在于：還包括使用標(biāo)簽對芋球莖切片組織進行標(biāo)記，接種24h后檢查發(fā)病，每個24h調(diào)查1次，并統(tǒng)計48h內(nèi)芋軟腐病發(fā)病率。
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