[發明專利]一種芋軟腐病菌接種方法

在審

• 申請號: 201911060273.4
• 申請日: 2019-11-01
• 公開（公告）號: CN110760560A
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發明（設計）人: 顏梅新;黃偉華
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區農業科學院
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24;C12R1/18
• 代理公司: 45129 南寧智卓專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 譚月萍;鄧世江

本發明公開了一種芋軟腐病菌接種方法，屬于農業技術領域，利用移液器吸取芋軟腐病菌懸浮液，滴至放置于直徑15cm培養皿的芋球莖切片組織表面，室溫保濕，蓋上皿蓋。其中芋軟腐病菌懸浮液濃度為1×10⁷個/mL，芋軟腐病菌懸浮液接種量為10uL，5?10個菌株每片芋切片組織；所測試芋球莖切片組織為長5?10cm、寬5?10cm、厚度1?2cm的芋球莖組織，采用吸水的棉花團置于直徑15cm培養皿中芋組織周圍保濕。本發明接種芋軟腐病菌后發病快、顯著、可操作性強、致病性測試周期短，從而提高芋軟腐病菌致病性缺陷突變體的篩選效率，為芋軟腐病菌致病性相關基因鑒定及機理研究提供技術支持，具有重要意義。

技術領域

本發明涉及農業技術領域，尤其涉及一種芋軟腐病菌接種方法。

背景技術

芋[Colocasia esculenta(L.)Schott]屬天南星科芋屬，為多年生宿根草本植物，原產于中國和印度。芋具有很高的營養價值，其球莖富含淀粉、維生素和氨基酸等營養成分，是世界各地廣為栽培的蔬菜和糧食作物，也是可選的生物能源作物，許多品種還具有藥用價值。我國以珠江流域種植最多，由于廣西地處亞熱帶，氣候條件非常適宜芋頭種植，已成為全國芋頭的主產區之一，其中以廣西荔浦種植的荔浦芋尤為出名，已成為國家地理標志保護農產品。據統計，全廣西芋頭種植(主要為檳榔芋)20萬畝，其中僅荔浦縣和賀州市種植檳榔芋超過8萬余畝，畝產平均達2000公斤，總產量達12萬噸，年總產值超過8億元，為兩地市農村經濟保穩定、促發展奠定了堅實的基礎。

近幾年，由于特色作物的發展和人們對芋頭產品的青睞，芋頭種植面積大幅度提高，出現供需兩旺的勢頭。但在芋產區可供栽培的品種少，各地主栽品種主要是各地人工自然選擇而形成的地方品種，病害發病率高，其中芋軟腐病發生較為嚴重。據報道該病病原為Erwinia carotovota subsp.Carotovora(Jones)Bersey et al.稱為胡蘿卜軟腐歐文氏菌胡蘿卜軟腐致病型，屬細菌。另外，由于芋軟腐病的危害使得芋作物不能連栽，從而導致土地不能充分利用，種植成本提高，影響產量及市場供需，目前芋軟腐病已成為阻礙芋頭產業發展的重要制約因素之一。

目前芋軟腐病菌致病機理研究需要大量突變體對芋進行致病性測定，需要大量的芋頭進行接種。目前關于芋致病性測定的方法未見報道。為了提高芋軟腐病菌致病性缺陷突變體的篩選效率，廣西壯族自治區農業科學院技術專家開展了芋軟腐病菌接種的研究工作，形成了一種芋軟腐病菌接種方法，提高芋軟腐病菌致病性缺陷突變體篩選效率，促進芋頭產業發展。

發明內容

本發明的目的在于提供一種芋軟腐病菌接種方法。目的是為高效篩選芋軟腐病菌致病性缺陷突變體提供一種芋軟腐病菌接種方法，通過采用本發明方法，接種芋軟腐病菌后發病快、顯著、可操作性強、縮短致病性測試周期，從而提高芋軟腐病菌致病性缺陷突變體的篩選效率，為芋軟腐病菌致病性相關基因鑒定及機理研究提供技術支持。

一種芋軟腐病菌接種方法，包括以下步驟：利用移液器吸取芋軟腐病菌懸浮液，滴至放置于直徑15cm培養皿的芋球莖切片組織表面，室溫保濕，蓋上皿蓋。

所述注移液器為實驗室用移液器，量程為100uL。

所述芋軟腐病菌懸浮液的制備，其步驟如下：

將病標樣腐爛組織經無菌水懸浮后涂板于LB培養基中，于28℃培養2d；分離得到菌體，經無菌水懸浮后，稀釋后涂板于LB培養基中，于28℃培養2d得到單菌落；將芋軟腐病菌在LB液體培養基中，于28℃搖床，200rpm，培養1d，獲得芋軟腐病菌野生型菌株懸浮液；將經Tn5轉化獲得的芋軟腐病菌突變體菌株分別在LB液體培養基中，于28℃搖床，200rpm，培養1d，得到芋軟腐病菌突變體菌株懸浮液。

所述芋球莖切片組織為長5-10cm、寬5-10cm、厚度1-2cm。