[發明專利]基于重組中華烏塘鱧卵黃蛋白原在水體雌激素污染檢測方法及應用

有效

• 申請號: 201911060062.0
• 申請日: 2019-11-01
• 公開（公告）號: CN110726847B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 周克夫;余鎰琦;孟坤;龍敏
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/68;C07K16/18;C07K16/06
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森;戴深峻

基于重組中華烏塘鱧卵黃蛋白原在水體雌激素污染檢測方法及應用，涉及環境污染檢測和免疫學領域，公開了一種基于重組中華烏塘鱧卵黃蛋白原(Vitellongenin,VTG)，利用重組蛋白作為抗原制備多克隆抗體。建立檢測VTG快速準確的免疫檢測方法。利用該方法檢測被17?β雌二醇(E2)誘導的雄性青鳉魚，發現被E2誘導的雄魚VTG水平比未誘導雄魚VTG水平明顯升高，利用該方法鑒定雌雄魚發現雌魚體內VTG明顯高于雄魚。差異極顯著，該技術可以用于環境雌激素污染的監測和雌雄魚的鑒別。

技術領域

本發明屬于環境污染檢測和免疫學領域，特別涉及一種基于重組中華烏塘鱧卵黃蛋白原在水體雌激素污染檢測方法及應用。

背景技術

隨著工業技術的發展，尤其是化學合成技術的突飛猛進，各種化學合成產品在人類生活中得到大量使用，而且這些化學物質在自然條件下很難降解。其中一類化學物質通過水，氣，土壤進入環境，其化學性質與動物激素有相似的功能，進入生物體后能夠與正常激素進行競爭，從而打亂人體正常生理功能，甚至造成性發育，性比混亂，有的則可能引起癌變。目前公認的環境雌激素主要包括：農藥類物質，主要的具有雌激素活性的農藥,除了硫丹、乙基對硫磷以及馬拉硫磷等少數幾種外，大部分是有機氯農藥；添加劑，主要有食品添加劑、塑料制品添加劑(存在于塑料食品器具中尤甚)；二惡英(dioxin)、多氯聯苯(PCBs)類:二惡英是人類生產活動產生的副產品,多氯聯苯(PCBs)是由209種同類物組成的一組氯代芳烴化合物,具有潛在的致癌生物效應。多氯聯苯曾經普遍用在工業和生活上，比如廣泛用于電容器和變壓器中的絕緣油、耐火增塑劑和液壓油，以及潤滑劑、密封劑、油漆涂料的添加劑、染料、殺蟲劑等的生產，這種物質進入食物鏈后，多存積在動物脂肪中。多環芳烴(PAHs)也是典型的有機污染物，主要產生于有機物的不完全燃燒過程,在石油產品以及木材處理過程中的化學混合物中都含有這類物質。許多證據顯示它可誘發嚙齒類動物乳腺腫瘤的發生。人工合成的雌激素主要有雌二醇(E2),已烯雌酚(DES),以及一些口服避孕藥等。除了有可能導致性別改變，上述環境雌激素均有三致作用，致癌致畸致突變。因此，開展有效快速檢測水體環境環境激素的檢測對于及時采取有效措施進行干預制止對于避免環境激素危害生物及人體健康至關重要。目前關于環境激素的檢測主要有物理化學方法，這類方法主要能夠快速定量定性檢測到某種化學物質，但是該類方法往往需要特殊昂貴的儀器設備，試劑以及專業的人員，樣品往往需要特殊的前處理，處理檢測時間長，費用高。此外，所檢測到的往往是某種化學物質的濃度，環境因素的影響常常往往比較復雜，很少只有一類物質其作用，有時是幾種物質共同作用的結果，這中間就包括幾種物質協調促進作用，也有相互拮抗作用。所以檢測到一種物質不能夠反應對生物的綜合作用，所以，應用生物監測的方法則能夠比較客觀反應環境對生物的綜合影響。目前采用生物標記物的形式監測環境污染是一個重要的趨勢。卵黃蛋白原(vitellogenin,VTG)是一種卵生生物雌性個體在生殖期間由肝細胞在雌激素誘導下表達后通過血淋巴進入卵巢，入卵后加工成為卵黃蛋白，主要用于卵子的后期發育提供營養。以魚類為例，雄魚體內和雌雄幼體一般沒有或很少存在VTG，但它們的肝臟存在這個基因，因此，在雌激素或者類似物的誘導下能夠誘導產生VTG進入血液，由于雄魚沒有卵巢，因此無法對血液中的VTG進行滅活，因此，雄魚體內一直存在著比較高水平的VTG，通過檢測雄魚體內的VTG就可以間接反應所生存的水體環境是否收到環境激素的污染。