[發明專利]一種具有降血壓活性的小麥蛋白肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201911058174.2
• 申請日: 2019-11-01
• 公開（公告）號: CN110669814B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 江正強;閆巧娟;張鵬;劉海杰;常暢
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K7/06;A61K38/08;A61K38/02;A23J3/18;A23J3/34;A23L33/18;A61P9/12
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 吳愛琴

1.一種制備具有降血壓活性的小麥蛋白肽的方法，包括如下步驟：

1）采用電解水預處理小麥谷朊粉；

制備所述電解水的電解溶液為0.1%的氯化鈉溶液；

2）調節體系的pH值至8.0-9.5，攪拌，得到小麥谷朊粉混懸液；

3）依次采用堿性蛋白酶和銅綠假單胞菌來源蛋白酶分步酶解；

4）將步驟3）所得酶解液過濾、濃縮和噴霧干燥得到小麥蛋白肽粉。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟1）中，所述電解水的pH值為：3.5-12.5；

所述小麥谷朊粉與電解水的比值為：50-200 g：1 L；

所述電解水預處理的時間為：4-8h。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：步驟3）的操作為：向所述小麥谷朊粉混懸液中加入堿性蛋白酶，水解，加入銅綠假單胞菌來源蛋白酶，繼續水解，兩步水解后沸水浴滅活，冷卻至室溫，得到酶解液；

其中，所述堿性蛋白酶的加入量為500-1500 U每克小麥谷朊粉；

所述加入堿性蛋白酶后水解的時間為4-8h；

所述銅綠假單胞菌來源蛋白酶的加入量為：500-1000 U每克小麥谷朊粉；

所述繼續水解的時間為4-8h；

所述水解和繼續水解的溫度均為40℃-60℃。

4.通過權利要求1-3中任一項所述的方法制備得到的小麥蛋白肽粉，所述小麥蛋白肽粉中分子量小于1000 Da的部分大于95%；

所述小麥蛋白肽粉的ACE體外半抑制濃度為0.21mg/mL；

所述小麥蛋白肽粉具有抗胃腸消化能力。

5.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法還進一步包括從所得小麥蛋白肽粉中分離得到ACE抑制肽組分的操作；

所述操作為：將所述小麥蛋白肽粉用鹽酸溶液溶解，離心處理，取上清液，進行凝膠層析，分離得到7個組分，依次記為F1組分、F2組分、F3組分、F4組分、F5組分、F6組分和F7組分；

其中，所述鹽酸溶液的濃度為10mM；

所述離心的條件為在10000r/min條件下離心10min；

采用凝膠層析，色譜條件：AKTApurifierUPC-900快速蛋白液相色譜儀；色譜柱尺寸為1000×10mm，柱料為葡聚糖凝膠G-15；流動相：10mM的鹽酸溶液；流速：0.8mL/min；檢測：UV280nm；

F6組分為洗脫時間在127.5-170 min的流出液；

F7組分為洗脫時間在170-212.5 min的流出液。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法還進一步包括從F7組分中分離鑒定得到肽段SAGGYIW和APATPSFW的操作；

所述操作為：對F7組分進行nanoLC-MS/MS分析，從中鑒定得到肽段SAGGYIW和APATPSFW。

7.權利要求5所述方法分離得到的ACE抑制肽組分F6組分和F7組分；其中，F7組分的ACE半抑制濃度為0.035mg/mL。

8.ACE抑制肽段SAGGYIW，其體外ACE半抑制濃度為2.65μM，或，ACE抑制肽段APATPSFW，其體外ACE半抑制濃度為41.1μM。

9.權利要求1-3任一項所述方法制備的小麥蛋白肽、權利要求4所述的小麥蛋白肽、權利要求7所述的F6組分及F7組分或權利要求8所述的肽段SAGGYIW或肽段APATPSFW在制備降血壓的藥物或預防和/或治療高血壓的藥物中的應用。

10.一種降血壓的藥物或預防和/或治療高血壓的藥物，含有權利要求1-3任一項所述方法制備的小麥蛋白肽、權利要求4所述的小麥蛋白肽、權利要求7所述的F6組分及F7組分以及權利要求8所述的肽段SAGGYIW和肽段APATPSFW中的至少一種。