[發(fā)明專利]一種基于腺病毒的基因編輯方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201911053013.4
• 申請日: 2019-10-31
• 公開（公告）號: CN110885799A
• 公開（公告）日: 2020-03-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 史其萍;賀小宏;任江濤;王延賓;韓露
• 申請（專利權(quán)）人: 南京北恒生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/113;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00;A61P31/00;A61P37/02
• 代理公司: 南京眾聯(lián)專利代理有限公司 32206
• 代理人: 朱欣欣

1.一種重組腺病毒，其特征在于：包括目標(biāo)表達(dá)框、位于目標(biāo)表達(dá)框5’端的第一同源臂、位于目標(biāo)表達(dá)框3’端的第二同源臂以及一個或兩個sgRNA靶標(biāo)序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組腺病毒，其特征在于：包括一個sgRNA靶標(biāo)序列，其位于第一同源臂的5’端或第二同源臂的3’端。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組腺病毒，其特征在于：包括兩個sgRNA靶標(biāo)序列，其分別位于第一同源臂的5’端和第二同源臂的3’端。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組腺病毒，其特征在于：還包括啟動子、反向末端重復(fù)序列（ITR）和/或包裝信號。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種重組腺病毒，其中所述腺病毒是Ad5、Ad5F35、 Ad35 、Ad55、Ad2、Ad5F11、pAdBM5或pADCMV5。

6.一種基因編輯的方法，其特征在于，包括以下步驟：以權(quán)利要求1-5任一項所述的重組腺病毒作為供體，在靶向細(xì)胞基因組目標(biāo)基因序列的sgRNA和靶向sgRNA靶標(biāo)序列的sgRNA存在下，通過CRISPR/Cas系統(tǒng)對細(xì)胞基因組進(jìn)行基因編輯。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述第一同源臂、第二同源臂分別與細(xì)胞基因組的目標(biāo)基因序列兩端的300-3000bp的序列互補(bǔ)。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述細(xì)胞為哺乳動物細(xì)胞、造血干細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞或者單核細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述靶向細(xì)胞基因組目標(biāo)基因序列的sgRNA以RNA的形式提供，或以編碼sgRNA的多核苷酸的形式提供；所述靶向sgRNA靶標(biāo)序列的sgRNA以RNA的形式提供，或以編碼sgRNA的多核苷酸的形式提供。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas系統(tǒng)中的Cas酶為Cas9或Cpf1。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于：所述Cas蛋白酶以編碼所述Cas蛋白酶的mRNA的形式提供，或以編碼所述Cas蛋白酶的多核苷酸的形式提供，或以蛋白形式提供。

12.一種利用權(quán)利要求1-5任一項所述的重組腺病毒在基因編輯的系統(tǒng)、組合物或試劑盒中的應(yīng)用。

13.一種利用權(quán)利要求7-11任一項所述的基因編輯的方法在對動物受精卵進(jìn)行基因編輯中的應(yīng)用。

14.一種利用權(quán)利要求1-5任一項所述重組腺病毒在制備工程化T細(xì)胞及其組合物中的應(yīng)用。

15.一種將權(quán)利要求14所制備的工程化T細(xì)胞及其組合物在制備用于治療癌癥、感染性疾病或自身免疫性疾病的藥物中的用途。