[發(fā)明專利]一種結(jié)核分枝桿菌檢測試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911052201.5
• 申請日: 2019-10-31
• 公開（公告）號: CN110607381B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉一博;林強(qiáng);金鑫浩;隋碩;任魯風(fēng);張未來;俞育德;于軍
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波胤瑞生物醫(yī)學(xué)儀器有限責(zé)任公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12R1/32
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 張黎

1.一種用于結(jié)核分枝桿菌檢測的試劑盒，其特征在于：包括獨(dú)立包裝的下述試劑：引物探針預(yù)混液、反應(yīng)預(yù)混液、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品；

所述的引物探針預(yù)混液中包括：

檢測結(jié)核分枝桿菌DNA的上游引物TB-DNA-F、

檢測結(jié)核分枝桿菌DNA的下游引物TB-DNA-R、

檢測結(jié)核分枝桿菌DNA的熒光探針TB-DNA-P、

檢測人actb基因的上游引物actb-F、

檢測人actb基因的下游引物actb-R、

檢測人actb基因的熒光探針actb-P；

所述的上游引物TB-DNA-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述的下游引物TB-DNA-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述的熒光探針TB-DNA-P的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，且5’端連接有熒光報(bào)告基團(tuán)FAM、3’端連接有淬滅基團(tuán)BHQ-1；

所述的上游引物actb-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

所述的下游引物actb-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；

所述的熒光探針actb-P的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示，且5’端連接有熒光報(bào)告基團(tuán)CY3、3’端連接有淬滅基團(tuán)BHQ-2；

SEQ ID NO:1：5’---CACATCGATCCGGTTCAGCG---3’；

SEQ ID NO:2：5’---GTCATAGGAGCTTCCGACCG---3’；

SEQ ID NO:3：5’---CTCGCCGAGGCAGGCATCCA---3’

SEQ ID NO:4：5’---GAGGGCATACCCCTCGTAGA---3’；

SEQ ID NO:5：5’---GTGCTATCCCTGTACGCCTC---3’；

SEQ ID NO:6：5’---CACTGGCATCGTGATGGACT’---3’；

所述的反應(yīng)預(yù)混液包括dATP 0.4mM、dCTP 0.4mM、dGTP 0.4mM、dTTP 0.4mM、MgCl₂ 4mM、BSA 10mg/mL、熱啟動(dòng)taq酶0.1U/mL、ROX 100nM、尿嘧啶-DNA-糖基酶0.1U/mL；

反應(yīng)預(yù)混液還包括單分子擴(kuò)增增強(qiáng)劑，所述的單分子擴(kuò)增增強(qiáng)劑為TritonX-100 0.2%和熱穩(wěn)定焦磷酸酶0.02U/mL；

所述的引物探針預(yù)混液中各引物和探針的濃度范圍為：

上游引物TB-DNA-F：1.5-2.5μM；

下游引物TB-DNA-R：1.5-2.5μM；

熒光探針TB-DNA-P：0.5-1.5μM；

上游引物actb-F：1.5-2.5μM；

下游引物actb-R：1.5-2.5μM；

熒光探針actb-P：0.5-1.5μM。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的引物探針預(yù)混液中各引物和探針的濃度范圍為：

上游引物TB-DNA-F：2μM；

下游引物TB-DNA-R：2μM；

熒光探針TB-DNA-P：1μM；

上游引物actb-F：2μM；

下游引物actb-R：2μM；

熒光探針actb-P：1μM。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的陽性質(zhì)控品為含結(jié)核分枝桿菌基因組序列的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于：所述的陰性質(zhì)控品為含人正常T淋巴細(xì)胞系H9細(xì)胞系DNA。