[發明專利]高通量、自動化的細胞連續培養方法及其應用

在審

• 申請號: 201911045900.7
• 申請日: 2019-10-30
• 公開（公告）號: CN111139216A
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 王振守;李敏;孫瑞強;曹云;周航
• 申請（專利權）人: 上海藥明生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;C12M1/36;C12M1/00
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

1.一種高通量、自動化的細胞連續培養的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)提供細胞培養物，將其接種至賽多利斯Ambr15^TM系統的反應器中，進行培養；

(2)進行細胞沉降形成上清液，一次或多次移除反應器中的上清液，每次移除上清液之后，取液槍頭進入上清液液面的深度不超過3mm；

(3)添加新鮮培養基；

(4)根據上清液中的細胞密度，計算放流速率(B)，維持目標細胞密度；

(5)重復上述步驟(2)～(4)，直到細胞連續培養完成。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：在將所述細胞培養物接種至反應器中之前，利用Ambr15^TM系統的原位清洗和滅菌步驟對Ambr15^TM系統進行清潔。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：在所述步驟(1)之后，在保持溫度控制開啟的條件下，關閉通氣、攪拌、pH和溶氧控制，使細胞沉降；優選的，通過將細胞培養液靜置10～25min完成細胞沉降。

4.根據權利要求1所述的方法，所述細胞連續培養在單個反應器中進行，并且步驟(2)中所述移除反應器中的上清液的具體操作為：

①根據預設的換液速率，計算總取液量：所述總取液量＝培養體積×換液速率；②根據總取液量以及取液槍頭每次的取液量，計算取液次數：所述取液次數＝總取液量/取液槍頭每次的取液量；③根據反應器中培養液體積與取液槍頭固定高度的對應關系，通過程序設置對取液槍頭每次取液的固定高度進行調整，直至在單個反應器中完成上清液的移除。

5.根據權利要求1所述的方法，所述細胞連續培養在N個反應器中進行，其中所述N≥2，并且步驟(2)中所述移除反應器中的上清液的具體操作為：

①根據預設的換液速率，計算總取液量：所述總取液量＝培養體積×換液速率；②根據總取液量以及取液槍頭每次的取液量，計算取液次數：所述取液次數＝總取液量/取液槍頭每次的取液量；③在每一個反應器中取液時，根據反應器中培養液體積與取液槍頭固定高度的對應關系，通過程序設置對取液槍頭每次取液的固定高度進行調整；④取液順序的確定：按照從第一個反應器到第N個反應器的順序，依次完成上清液的第一次移除；然后，按照從第N個反應器到第1個反應器的順序，依次完成上清液的第二次移除；直至在多個反應器中完成上清液的移除。

6.根據權利要求4或5所述的方法，其中所述換液速率為0.5～2.0VVD；優選的，所述換液速率為0.9VVD。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步驟(2)之后繼續對細胞培養物進行培養，使細胞培養液重新處于控制狀態。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)的具體操作為：加入與步驟(2)中移除的上清液等量的新鮮培養基至反應器中，完成換液；優選的，所述新鮮培養基選自Advanced CHO生產培養基、多寧S5生產培養基、含5％Feed210的多寧S5生產培養基、含5％FM016的多寧S5生產培養基、含3％CB7a的多寧S5生產培養基、GE prototype生產培養基和含3％CB7a的GE prototype生產培養基中的任一種；更優選的，所述培養基為含5％feed210的多寧S5生產培養基或GE prototype生產培養基。