[發(fā)明專利]同時(shí)檢測衛(wèi)式、斯式和異盤并殖吸蟲的引物組及試劑盒有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911045773.0 | 申請日： | 2019-10-30 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110791570B | 公開（公告）日： | 2021-02-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 卓洵輝;孔慶明;童群波;陸紹紅;丁豪杰;鄭斌;樓滌;丁建祖;陳睿 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6888 | 分類號(hào)： | C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200 | 代理人： | 林超 |
| 地址： | 310007 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 同時(shí) 檢測 吸蟲 引物 試劑盒 | ||
本發(fā)明公開了一種同時(shí)檢測衛(wèi)式、斯式和異盤并殖吸蟲的引物組、試劑盒及方法。包括試紙條、并殖吸蟲DNA陽性對照液和檢測液，檢測液具體包括LAMP緩沖液、引物組、Bst 2.0 DNA聚合酶、dNTP、MgSO4和ddH2O，引物組包括外引物F3、外引物B3、內(nèi)引物FIP、內(nèi)引物BIP、探針Probe。本發(fā)明可快速檢測樣品中并殖吸蟲基因組DNA，提供了并殖吸蟲基因組DNA檢測方法，可用于檢測并殖吸蟲成蟲、囊蚴、蟲卵的基因組DNA。本發(fā)明敏感性高、特異性強(qiáng)，有較好的穩(wěn)定性，操作簡單，能較好地滿足不同層次人員的需求，易于向基層推廣。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域的診斷技術(shù)，特別是涉及衛(wèi)式、斯式和異盤并殖吸蟲檢測的引物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)
并殖吸蟲屬蟲種的成蟲寄居于宿主的肺內(nèi)，俗稱肺吸蟲。迄今為止，全世界已報(bào)道的并殖吸蟲近50余種，其中32種在我國報(bào)道，以衛(wèi)氏并殖吸蟲、斯氏并殖吸蟲和異盤并殖吸蟲流行最廣，且均能寄生于人體。并殖吸蟲成蟲常寄生于肺，但其童蟲有時(shí)會(huì)寄生于肝、腦、眼眶、皮下等組織和器官，由于蟲體在體內(nèi)移行引起多種組織和器官損傷。由于并殖吸蟲病癥狀復(fù)雜，常涉及多個(gè)器官，給該病的診斷帶來了難題，常被誤診為肺結(jié)核、肺炎等。
傳統(tǒng)的并殖吸蟲診斷方法有病原學(xué)診斷及免疫學(xué)診斷。病原學(xué)診斷有痰或糞便的蟲卵檢查及皮下組織的活檢，然后在潛伏期或慢性感染中，蟲卵難以被觀察到，極易出現(xiàn)漏檢；皮內(nèi)試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)可用于進(jìn)行診斷檢測，但無法區(qū)分既往感染還是現(xiàn)癥感染。本發(fā)明設(shè)計(jì)了一組能同時(shí)檢測衛(wèi)氏并殖吸蟲、斯氏并殖吸蟲和異盤并殖吸蟲的引物，結(jié)合核酸檢測試紙條，可用于開展現(xiàn)場快速檢測，無需專門的儀器設(shè)備，操作簡單，對于疾病的預(yù)防及控制具有重要的意義。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有檢測技術(shù)上的缺陷，立足于疾病防控上的需求，本發(fā)明提供了一組可同時(shí)檢測衛(wèi)氏并殖吸蟲、斯氏并殖吸蟲和異盤并殖吸蟲的引物組、試劑盒和方法，進(jìn)行環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增，特異性強(qiáng)、靈敏度高。
本發(fā)明提供體引物組、核酸檢測試紙條及檢測液，具體包括LAMP緩沖液，8U Bst2.0DNA聚合酶，1.5mM dNTP，7.5mM MgSO4和ddH2O。本發(fā)明還提供了并殖吸蟲基因組DNA檢測方法，可用于檢測并殖吸蟲成蟲、囊蚴、蟲卵的基因組DNA，能夠準(zhǔn)確快速地現(xiàn)場檢測樣品，操作方便。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：
一、一種能同時(shí)檢測衛(wèi)式、斯式和異盤并殖吸蟲的引物組：
所述的引物組具體序列如下：
外引物F3：GCTTCGAATAGTCAGGGCG，如SEQ ID No.1；
外引物B3：GCAGTGATACCAGCAGTGA，如SEQ ID No.2；
內(nèi)引物FIP：CTCGAACGCTGCGTCGTTGAGTAAGTGCTCAAGTTGCCA CC，如SEQ ID No.3；
內(nèi)引物BIP：ACGTTCGACTACCCCCATTCGACGGATTAGCGTTCGATG GC，如SEQ ID No.4；
探針Probe：CAGGGTCACGTGATTCTCATCAGC，如SEQ ID No.5。
所述的外引物F3和B3的濃度均為0.2μmol/μl，內(nèi)引物FIP和BIP的濃度均為1.6μmol/μl，探針Probe濃度為0.8μmol/μl。
所述引物組中的內(nèi)引物FIP的5’端進(jìn)行生物親和素修飾，探針Probe的5’端進(jìn)行FITC修飾。
二、一種能同時(shí)檢測衛(wèi)式、斯式和異盤并殖吸蟲的試劑盒：
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