[發明專利]同時檢測衛式、斯式和異盤并殖吸蟲的引物組及試劑盒

有效

• 申請號: 201911045773.0
• 申請日: 2019-10-30
• 公開（公告）號: CN110791570B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 卓洵輝;孔慶明;童群波;陸紹紅;丁豪杰;鄭斌;樓滌;丁建祖;陳睿
• 申請（專利權）人: 浙江省醫學科學院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林超

1.一種能同時檢測衛式、斯式和異盤并殖吸蟲的引物組和探針，其特征在于：

所述的引物組包含外引物和內引物，具體序列如下：

外引物F3：GCTTCGAATAGTCAGGGCG，如SEQ ID No.1；和

外引物B3：GCAGTGATACCAGCAGTGA，如SEQ ID No.2；和

內引物FIP：CTCGAACGCTGCGTCGTTGAGTAAGTGCTCAAGTTGCCACC，如SEQ ID No.3；和

內引物BIP：ACGTTCGACTACCCCCATTCGACGGATTAGCGTTCGATGGC，如SEQ ID No.4；

探針Probe：CAGGGTCACGTGATTCTCATCAGC，如SEQ ID No.5。

2.根據權利要求1所述的一種能同時檢測衛式、斯式和異盤并殖吸蟲的引物組和探針，其特征在于：所述的外引物F3和B3的濃度均為0.2 μmol/μl，內引物FIP和BIP的濃度均為1.6 μmol/μl，探針Probe濃度為0.8 μmol/μl。

3.根據權利要求1所述的一種能同時檢測衛式、斯式和異盤并殖吸蟲的引物組和探針，其特征在于：所述引物組中的內引物FIP的5’端進行生物親和素修飾，探針Probe的5’端進行FITC修飾。

4.一種能同時檢測衛式、斯式和異盤并殖吸蟲的試劑盒，其特征在于：包括試紙條、并殖吸蟲DNA陽性對照液和檢測液，檢測液具體包括LAMP緩沖液、引物組、Bst 2.0 DNA聚合酶、dNTP、MgSO₄和ddH₂O，所述的引物組為權利要求1-3任一所述的引物組。

5.根據權利要求4所述的一種能同時檢測衛式、斯式和異盤并殖吸蟲的試劑盒，其特征在于：所述的LAMP緩沖液包括終濃度為20 mM的Tris-HCl、10 mM的KCl、10 mM的（NH₄）₂SO₄、質量分數0.1% 的Tween-20和1M的甜菜堿。

6.根據權利要求4所述的一種能同時檢測衛式、斯式和異盤并殖吸蟲的試劑盒，其特征在于：所說的并殖吸蟲DNA陽性對照液中衛式并殖吸蟲DNA的濃度為50 ng/μL。

7.根據權利要求4所述的一種能同時檢測衛式、斯式和異盤并殖吸蟲的試劑盒，其特征在于：所述的試紙條包括依次布置的樣品墊、硝酸纖維素膜、吸水墊，吸水墊作為手持部分；硝酸纖維素膜作為反應區，在硝酸纖維素膜之上布置有金標墊、C線和T線，C線為質控線，T線為檢測線，從樣品墊到吸水墊方向的硝酸纖維素膜上依次布置金標墊、T線和C線；金標墊上噴抗FITC（異硫氰酸熒光素）標記的乳膠顆粒，T線為親和素，C線為羊抗鼠單克隆抗體。