[發明專利]用于分離精子細胞群的核酸適體及方法

在審

• 申請號: 201911042691.0
• 申請日: 2019-10-30
• 公開（公告）號: CN110607303A
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發明（設計）人: 顧軍;顧帥;蘭丹;陳華裕
• 申請（專利權）人: 多能干細胞再生醫學科技(廣州)有限公司
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N5/076
• 代理公司: 11280 北京泛華偉業知識產權代理有限公司
• 代理人: 李渤

本發明提供了一種用于分離精子細胞群的核酸適體，所述核酸適體為X和/或Y染色體適體，其中：所述X染色體適體源于人類X染色體著絲粒alpha衛星序列；所述Y染色體適體源于人類Y染色體的長臂末端的衛星III序列。本發明還提供了一種基于所述核酸適體分離精子細胞群的方法，所述方法使用X染色體適體和/或Y染色體適體分離精子，所述方法包括以下步驟：(i)選擇人類X或Y染色體序列，篩選出X或Y染色體適體；(ii)將所獲得X或Y染色體適體與待分離的精子的PBS溶液共培養。本發明基于核酸適體對精子進行標記篩選，對精子不會造成損失，可在短時間內大批量進行精子分離篩選，得到X精子或Y精子。

技術領域

本發明屬于遺傳技術領域，尤其涉及一種基于核酸適體分離精子細胞群的方法。

背景技術

X精子和Y精子所攜帶的性染色體不同，這2種類型的精子之間存在著某些性狀差異，這就使得利用某種相應的方法將其分離成為可能。目前己有諸多關于X精子和Y精子分離技術的報道。

其中，白蛋白梯度游動分離法的原理基礎是：Y精子的體積比X精子小，并且在高密度的人血清白蛋白液柱中向下游動的速度比較快，通過丟棄白蛋白柱上層，收集最底下22％的部分而得到富集Y精子液體。該方法分離得到的Y精子用于受精后產下的男孩比率為70％～80％。然而，在這種方法中，假如給婦女施用克羅米酚檸檬酸鹽以促使排卵時，出生的性別比例就會改變，女嬰反而達到73％。再者，這一方法只能純化Y精子群，不能得到X精子群。

精子表面抗原免疫學分離法利用精子細胞表面的H-Y抗原來分離精子。H-Y抗原是一種由Y染色體上的SMCY基因編碼的雄性特異性組織相容性抗原，存在于所有含有Y染色體包括Y精子的細胞表面，而X精子由于不含有Y染色體，所以不編碼H-Y抗原。Zavos利用單克隆H-Y抗體處理兔和牛的精液，進行人工授精后得到的雌性后代分別為79％和74％(Panayiotis M.Zavos,Ed.S.,Ph.D.Preconception sex determination via intra-vaginal administration of H-Y antisera in rabbits[J].Theriogenology,1983,20(2):235-240)。國內的羅承浩等報道，用H-Y抗原法處理奶牛精子，受精后得到81.8％的雌性率(羅承浩,蔡耀垣,丘陵等.精子性別化對乳牛性別控制的研究試驗[J].草食家畜,1992(s1):110-112.)。但這種方法由于用到了抗原，可能會產生免疫原性。

自由電泳分離法根據X精子和Y精子的表面電荷可能存在差別的原理，將精子放入特制的電泳容器中，并加以一定持續電場，使得兩種電荷量不同的精子朝著不同的路徑泳動而得以分離。應用該方法進行人類精子的分離試驗時，用F檢驗分析表明，分離得到的X精子樣本相對純度較高，而Y精子純度較低，分離后的精子受到很大的影響，活力大大降低。

離心沉積分離法根據X精子和Y精子在密度、體積和形狀方面的差異來分離精子。在一定的溶液中，X精子的沉降速率比Y精子快。但由于X精子本身的差異比Y精子差異大，因為該方法分離得到的XY精子的結果不穩定，缺乏重復性，不同的實驗室得到不一致的結果。

精子體積差異分離法依據的原理是X精子體積比Y精子體積要大。基于體積差異這一發現，科研人員研究設計出了一種安裝上相差光學系統的流式細胞儀來進行精子分離。該方法吸引人之處在于進行精子分離時不需要DNA染色。但是該方法實際分離并沒有達到理論預計的效果，X或Y精子分離純度均沒有達到80％以上。