[發(fā)明專利]用于分離精子細胞群的核酸適體及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911042691.0
• 申請日: 2019-10-30
• 公開（公告）號: CN110607303A
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 顧軍;顧帥;蘭丹;陳華裕
• 申請（專利權(quán)）人: 多能干細胞再生醫(yī)學(xué)科技(廣州)有限公司
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N5/076
• 代理公司: 11280 北京泛華偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 李渤

1.一種用于分離精子細胞群的核酸適體，所述核酸適體為X和/或Y染色體適體，其中：

所述X染色體適體源于人類X染色體著絲粒alpha衛(wèi)星序列；

所述Y染色體適體源于人類Y染色體的長臂末端的衛(wèi)星III序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸適體，其中，所述X染色體適體為5’-GTTCAGCTCTGTGAGTGAAA-3’；優(yōu)選地，所述Y染色體適體為5’-TCCATTCGATTCCATTTTTTTCGAGAA-3’。

3.一種基于核酸適體分離精子細胞群的方法，其特征在于，所述方法使用X染色體適體和/或Y染色體適體分離精子，所述方法包括以下步驟：

(i)選擇人類X和/或Y染色體序列，篩選出X和/或Y染色體適體；

其中，所述X染色體適體源于人類X染色體著絲粒alpha衛(wèi)星序列，所述Y染色體適體源于人類Y染色體的長臂末端的衛(wèi)星III序列；

(ii)將所獲得X和/或Y染色體適體與待分離的精子的PBS溶液共培養(yǎng)；

(iii)通過洗滌，分選出人X精子或Y精子。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述X染色體適體為5’-GTTCAGCTCTGTGAGTGAAA-3’。

5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述Y染色體適體為5’-TCCATTCGATTCCATTTTTTTCGAGAA-3’。

6.如權(quán)利要求3-5任一項所述的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步驟：

(1)選擇人類X和/或Y染色體序列，篩選出X和/或Y染色體適體；

(2)用鏈霉親和素包被培養(yǎng)板或磁性微球；優(yōu)選地，在4℃下溫育過夜；

(3)用含有0.05％體積分數(shù)的Tween-20的磷酸鹽緩沖液洗滌步驟(2)獲得的鏈霉親和素包被的培養(yǎng)板或磁性微球；優(yōu)選地，洗滌2-5次；

(4)將生物素標記的X或Y染色體適體加入步驟(3)獲得的洗滌后的包被的培養(yǎng)板或磁性微球中溫育；優(yōu)選地，在37℃下溫育2-6小時，優(yōu)選地，溫育4小時；

(5)用磷酸鹽緩沖液洗滌步驟(4)獲得的溫育后的培養(yǎng)板或磁性微球；

(6)向步驟(5)洗滌后的培養(yǎng)板或磁性微球加入含有待分離的精子的PBS溶液溫育；優(yōu)選地，在37℃下溫育1-18小時；

(7)取出培養(yǎng)板或磁性分離磁球，洗滌培養(yǎng)板或磁性微球以棄去未吸附的精子，分選出人X精子和/或Y精子。

7.如權(quán)利要求3-5中任一項所述的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步驟：

(1)選擇人類X和/或Y染色體序列，篩選出X和/或Y染色體適體；

(2)將步驟(1)獲得X和/或Y染色體適體進行熒光標記；優(yōu)選地，用cy-3進行標記；

(3)加入含有待分離的精子的PBS溶液溫育后用磷酸鹽緩沖液洗滌；優(yōu)選地，在37℃下溫育1-18小時；優(yōu)選地，洗滌2-5次，更優(yōu)選地，洗滌3次；

(4)通過流式細胞儀進行細胞篩選，分選出人X精子或Y精子。