[發明專利]一種基于金納米簇熒光增強的乳酸檢測方法

有效

• 申請號: 201911040989.8
• 申請日: 2019-10-30
• 公開（公告）號: CN110699422B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 王光麗;孫冬雪;李蘋;吳秀明
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12Q1/32
• 分類號: C12Q1/32;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明中，基于金納米簇(AuNCs)的熒光對物質的氧化還原狀態依賴性建立了新型熒光增強型生物測定體系。AuNCs的熒光被鐵氰化物明顯淬滅，而不受其相應的亞鐵氰化物的影響。通過利用乳酸脫氫酶(LDH)/心肌黃酶的酶級聯催化反應來催化轉化鐵氰化物變成亞鐵氰化物，開啟了金納米簇的熒光。與文獻所報道的基于金納米簇的猝滅法酶檢測體系相比，該方法具有明顯的優勢，檢測乳酸的線性范圍為5×10^?7?5×10^?3M，檢測限低至0.09μM。

技術領域

本發明涉及一種分析檢測技術,屬于分析檢測技術領域。

背景技術

描述與本發明最接近的現有技術的狀況和存在的問題。

貴金屬納米團簇，例如金納米簇(AuNCs)，具有強發光性，良好的光穩定性，高生物相容性和大的斯托克斯位移等特征[XieJ.；ZhengY.；YingJ.Y.J.Am.Chem.Soc.2009,131,888-889；LuY.；ChenW.Chem.Soc.Rev.2012,41,3594-3623]，使其廣泛應用于生物傳感、生物成像和納米醫學等領域[ChenL.Y.；WangC.W.；YuanZ.；ChangH.T.Anal.Chem.2015,87,216-229；DoaneT.L；BurdaC.Chem.Soc.Rev.2012,41,2885-2911]。AuNCs與不同天然酶(主要是氧化還原酶和水解酶)的聯合應用已被證明是檢測生物分子的良好平臺。例如，酶催化反應產生的H₂O₂或醌類物質是AuNCs的有效淬滅劑，可用來檢測各種酶催化反應，包括葡萄糖氧化酶[JinL.；ShangL.；GuoS.；FangY.；WenD.；WangL.；YinJ.；DongS.Biosens.Bioelectron.2011,26,1965-1969]，膽固醇氧化酶[ChenX.；BakerG.A.Analyst2013,138,7299-302]，酪氨酸酶[TengY.；JiaX.；LiJ.；WangE.Anal.Chem.2015,87,4897-4902]或乙酰膽堿酯酶/膽堿氧化酶的酶級聯[LiH.；GuoY.；XiaoL.；ChenB.Biosens.Bioelectron.2014,59,289-292]進行酶的活性/底物/抑制劑的檢測。另外，酶催化所誘導釋放的金屬離子(Cu²⁺或Fe³⁺)也可以作為AuNCs的猝滅劑，用于檢測堿性磷酸酶[ChenY.；LiW.,；WangY.；YangX.；ChenJ.；JiangY.；YuC.；LinQ.J.Mater.Chem.C2014,2,4080-4085]和焦磷酸酶[DengH.H.；WangF.F.；ShiX.Q.；PengH.P.；LiuA.L.；XiaX.H.；ChenW.Biosens.Bioelectron.2016,83,1-8]的活性。AuNCs還可以通過堿性磷酸酶/酪氨酸酶的級聯反應生成兒茶酚誘導硼酸修飾的AuNCs的熒光猝滅來檢測堿性磷酸酶的活性[LiuQ.；LiH.；JinR.；LiN.；YanX.；SuX.Sens.Actuators,B:Chem.2019,281,175-181]。研究還表明，胰蛋白酶消化蛋白質模板可導致AuNCs的熒光猝滅，從而可以檢測胰蛋白酶[HuL.；HanS.；ParveenS.；YuanY.；ZhangL.；XuG.Biosens.Bioelectron.2012,32,297-299]。雖然應用較多，但報道的這些基于AuNCs的酶傳感體系仍然局限于有限數量的天然酶，并且基本采用熒光猝滅機制進行測定，這具有較大的局限性：一方面，信號猝滅分析通常具有低靈敏度和高的背景；另一方面，它們很有可能產生假陽性信號，因為溶劑或其它基質可能很容易導致熒光猝滅。探索基于金納米簇的、具有高靈敏度和高準確性的新型信號增強型酶檢測無疑具有很大的吸引力。